外泌體介導HCV蛋白誘導肝纖維化的作用與機制研究

《外泌體介導HCV蛋白誘導肝纖維化的作用與機制研究》是依託上海交通大學，由王怡仲擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：外泌體介導HCV蛋白誘導肝纖維化的作用與機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：王怡仲
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

慢性C型肝炎病毒（HCV）感染是引發肝纖維化的主要病因之一。肝星狀細胞（HSC）是介導肝纖維化發生的首要細胞。HCV的直接致肝纖維化作用和機制尚不清楚。HSC並不支持HCV的進入與複製，HCV蛋白是否可以通過其它方式進入HSC並激活HSC還有待證實。外泌體是活細胞釋放到細胞外基質的小囊泡體，其重要作用是通過傳遞其內容物（蛋白質、RNA等）介導細胞間的通訊。我們假說外泌體可傳遞HCV蛋白至HSC並激活HSC，誘導肝纖維化發生。本項目將通過HCV感染肝實質細胞、HCV感染肝實質細胞源外泌體與HSC的共培養，檢測HSC炎症因子（TNF-α、IL-1β等）與激活標記（α-SMA等）的表達；並將表達HCV蛋白的肝實質細胞源外泌體處理HSC來探討不同HCV蛋白的致肝纖維化作用；最後通過阻斷炎症信號通路（NF-κB、JNK）的激活來闡明相關機制，為揭示HCV的直接致肝纖維化作用提供重要的理論和實驗依據。

結題摘要

C型肝炎病毒（HCV）感染是全球重要的公共衛生問題，HCV是引發慢性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌的主要病原。HCV與宿主免疫系統之間複雜的相互作用決定HCV感染的臨床表現和肝臟損傷程度。儘管HCV急性和慢性感染都會引發宿主的細胞和體液免疫反應，但是這些免疫反應大多數情況下並不能有效的清除病毒，導致大部分的HCV感染進展為持續的慢性感染。已有研究表明慢性HCV感染是導致肝纖維化發生的主要病因之一，肝星狀細胞（Hepatic stellate cells, HSC）是介導肝纖維化發生的首要細胞。我們的研究結果證實HCV感染的肝細胞（JFH-1-Huh7）可直接激活人HSC細胞系LX-2和原代HSC細胞，在共培養的情況下上調HSC中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α、TGF-β1與趨化因子MCP-1、和RANTES的表達，以及HSC中α-SMA的表達。在外泌體的機制研究方面，由於外泌體純化的得率低，尚未得到可靠的實驗數據。因此，我們對該項目的部分研究內容進行調整，重點研究了茶多酚（EGCG）調節細胞先天免疫抑制HCV的作用與機制，證實了EGCG可調節poly I:C激活的肝實質細胞TLR3信號通路，上調poly I:C誘導的TLR3、RIG-I、干擾素-lambda 1、干擾素刺激因子（ISG15、ISG56、MxA和OAS-1）的表達，並可協同poly I:C抑制HCV在肝實質細胞中的複製。本項目的研究工作在體外細胞水平證實了HCV感染的肝實質細胞可以直接激活HSC細胞，為今後進一步深入研究HCV的致病機制提供線索。此外，我們的研究發現EGCG可增強poly I:C誘導的肝實質細胞先天免疫反應，並且可協同poly I:C抑制HCV在肝實質細胞中的複製，為揭示EGCG的抗病毒功能和潛在的臨床套用提供實驗依據。