增殖細胞核抗原

增殖細胞核抗原

增殖細胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen簡稱PCNA)由Miyachi等於1978年在 SLE(系統性紅斑狼瘡)患者的血清中首次發現並命名,因其只存在於正常增殖細胞及腫瘤細胞內而得名,以後的研究發現PCNA與細胞DNA合成關係密切,在細胞增殖的啟動上起重要作用,是反映細胞增殖狀態的良好指標,因此近年來掀起了對PCNA研究的熱潮,尤其在腫瘤方面。

基本介紹

  • 中文名:增殖細胞核抗原
  • 簡稱:PCNA
  • 首次發現:1978年
  • 類型:蛋白質
  • 存在於:細胞核
  • 英文名:Proliferating Cell Nuclear Antigen
PCNA的特點,腫瘤中PCNA的研究,肺癌中PCNA的研究,3.1 PCNA與肺癌發生髮展的關係,3.2 PCNA與肺癌分型的關係,3.3 PCNA與肺癌分化程度的關係,3.4 PCNA與肺癌分期的關係,3.5 PCNA與肺癌血管受侵的關係,3.6 PCNA與肺癌預後的關係,3.7 PCNA與肺癌復發的關係,3.8 PCNA與肺癌其它標誌物的相關性,

PCNA的特點

PCNA是一種分子量為36KD的蛋白質,在細胞核內合成,並存在於細胞核內,為DNA聚合酶δ的輔助蛋白。該酶三維結構呈夾子形,可以夾在DNA模板鏈上滑動,並連線著聚合酶δ,確保聚合酶工作過程中不會從模板鏈脫離。該蛋白對聚合酶的持續合成能力起重要作用。
在細胞核記憶體在可溶性與不溶性兩種PCNA,可溶性PCNA在細胞周期各期中均有表達,其量在DNA合成過程中不發生明顯變化,易被去污劑提取、甲醇破壞;不溶性PCNA較穩定,不易被去污劑洗脫、甲醇破壞,這種PCNA在G0~G1期細胞中無明顯表達,G1晚期,其表達大幅度增加,S期達到高峰,G2~M期明顯下降,其量的變化與DNA合成一致,檢測其在細胞中的表達,可作為評價細胞增殖狀態的一個指標[1,2,4]。

腫瘤中PCNA的研究

腫瘤細胞具有旺盛的增殖活性,而PCNA可作為評價細胞增殖狀態的指標。因此,國內外在許多腫瘤中進行了PCNA的研究,涉及PCNA與腫瘤發生髮展[5,6]、分級[1,7~10]、分期[1,10]、放療敏感性[11,12]、預後[1,7,8,10,13~20]、復發和轉移[1,21]、死亡原因[20]、腫瘤標誌物[18,22]等各個方面的相關性,得出了許多結論,但在某些方面因作者和所研究腫瘤的不同,還存在一些爭議,即使尚沒有爭議的結論,也是從一種或幾種腫瘤中得出的,這些結論是否適用於所有腫瘤,仍有待進一步研究。

肺癌中PCNA的研究

PCNA在肺癌中的研究也較多,許多作者致力於這方面的探討,期望找到有意義、有價值的結果,但到今為止,PCNA在肺癌中研究所得出的一些結果也同樣存在爭論[23]。

3.1 PCNA與肺癌發生髮展的關係

夏書月等[6]在研究肺鱗癌的發生、發展過程中,發現PCNA的表達有逐漸增高,陽性細胞數逐漸增多的趨勢。在輕、中、重度不典型增生、原位癌及浸潤癌中,PCNA標記指數分別為12.5±8.7、43.3±14.9、68.1±9.1、74.6±8.2、65.4±23.6,與正常和輕、中度不典型增生的上皮相比,浸潤癌、原位癌和重度不典型增生的上皮細胞PCNA標記指數明顯升高,PCNA陽性細胞數也明顯增多。認為PCNA表達為細胞異常增殖的標誌,可作為肺鱗癌早期診斷的參考指標。但這僅是在肺鱗癌中的初步探索,且病例數較少,能否作為肺鱗癌早期診斷參考指標,還需進一步驗證。

3.2 PCNA與肺癌分型的關係

有作者[15,24]認為PCNA在不同類型肺癌中表達不同,鱗癌PCNA標記指數平均約為52%,腺癌為49%,大細胞肺癌為76%,小細胞肺癌為63%。何杰等[25]的結果為:肺鱗癌標記指數為0.51±0.23,腺癌為0.69±0.34。在同一類型不同亞型之間也表達不同。王恩華等[13]在86例肺腺癌中對各亞型進行分析:PCNA在細支氣管肺泡癌中表達約為0.22±0.17,腺泡狀腺癌中約為0.36±0.12,大細胞癌中約為0.67±0.10。但也有作者認為PCNA的表達僅能反映細胞的增殖狀態,與組織學類型無關。Castellano[26]、Fontanini[14]、Fujii[27]等支持這種觀點。

3.3 PCNA與肺癌分化程度的關係

有研究表明:PCNA表達隨肺癌分化程度的增高而減少。王恩華[13]在肺腺癌的研究中發現:高分化組最低,PCNA標記指數約為0.19±0.10,中分化組稍高,約為0.35±0.10,低分化組最高,約為0.55±0.17;何杰等[25]分別分析了肺鱗癌、肺腺癌中PCNA的表達,發現PCNA標記指數與腫瘤分級呈正相關,Zhao等[28]在73例肺癌中得出了同樣結論。可見肺癌中PCNA的表達可反映肺癌細胞分化的好壞,預示腫瘤惡性度的高低。這與在許多種其他腫瘤中的研究發現基本一致。

3.4 PCNA與肺癌分期的關係

大多數研究表明:PCNA表達與肺癌分期相關,分期愈晚,PCNA表達愈高。Ishida等[29]在211例非小細胞肺癌中統計出Ⅰ、Ⅱ、Ⅲa、Ⅲb期各期PCNA表達平均值分別為30%、24%、40%、50%,有逐漸增高的趨勢,但Ⅰ、Ⅱ期差別不大。王恩華等[13]的研究也認為,肺癌中PCNA的表達與N分期及M分期相關,隨著分期的增加,PCNA表達增加。但也有作者持相反意見,Fontanini等[14]在周圍型非小細胞肺癌的研究中發現,PCNA的表達與分期無關,他們的結果為:T1期PCNA表達值平均約為18%,T2期約為10%。是否是由於在早期(Ⅰ、Ⅱ)肺癌中PCNA表達受宿主免疫系統抑制,變化不明顯,而晚期肺癌因免疫抑制減弱,表達明顯增加,還有待繼續探討。

3.5 PCNA與肺癌血管受侵的關係

Fontanini等[14]在40例周圍型,淋巴結陰性的非小細胞肺癌(NSCLC)中發現:PCNA的表達與血管受侵明顯相關,有血管受侵組的PCNA表達明顯高於無血管受侵組,平均值分別為40%和10%。Fujii等[27]也發現PCNA表達與肺癌血管受侵明顯相關。這可能與PCNA高表達者分化差,惡性度高,容易侵蝕血管有關。

3.6 PCNA與肺癌預後的關係

部分作者認為:PCNA表達愈低,其生存時間愈長,預後愈好。王恩華等[13]分析了86例手術切除的肺腺癌病例,發現術後存活3年以內組與5年以上組之間,PCNA表達值有顯著差異,其標記指數分別為0.42±0.20和0.22±0.15;Ishida等[29]在Ⅰ期NSCLC中也發現,5年生存組中,PCNA(+)組生存率明顯低於PCNA(-)組;Fujii等[26]的研究結果也支持這種觀點。但有相當多的作者認為單憑PCNA不能評價NSCLC的預後,Matturri[30]、Monraval[31]、Castellano[26]、Ebina[32]等各自分別研究了PCNA的表達與術後NSCLC生存時間的關係,沒找到明確的相關性。考慮這是由於肺癌的預後是由多種因素:如病理類型、病理分期、分化、治療情況、合併症、年齡、身體狀況、PCNA的表達等綜合決定的,單憑PCNA這一種因素,難以預測肺癌的預後。

3.7 PCNA與肺癌復發的關係

Ogawa等[33]在35例術後復發的Ⅰ期NSCLC中發現,PCNA(+)組復發時間明顯短於PCNA(-)組,中位無瘤生存時間分別為2.5年和4年,認為PCNA可預測Ⅰ期NSCLC術後復發時間的長短。但所研究病例太少,範圍狹窄,結果有待進一步證實。

3.8 PCNA與肺癌其它標誌物的相關性

Fontanini等[14]在周圍型肺癌中發現PCNA表達在DNA異倍體中明顯高於DNA整倍體,並與異倍體DNAS期分數明顯相關,PCNA表達高的分裂指數高於PCNA表達低的。還有研究[13,15,24,28,29,34]表明肺癌中PCNA的表達與細胞構成、DNA指數、AgNORs計數、Ki67等相關。這些多為首次報導,不知結果能否重複,若結論能確證,則無論在臨床上,還是基礎研究中,PCNA的套用和研究將會更為廣泛。
從上可見,肺癌中PCNA的研究已深入到了肺癌的各個方面,但在許多方面所得結果還不統一,造成這種結果不一致的原因很多,初步分析包括以下諸多因素:1)腫瘤本身的因素:腫瘤與腫瘤之間及同一腫瘤不同部位之間,細胞增殖都存在很大的差異[26,36,37],致使PCNA表達不均。2)取材的影響:由於腫瘤內部不同部位之間PCNA表達不均,取材時可能取到高表達區,也可能取到中表達區或低表達區,以致計數結果不能代表整個腫瘤情況。3)製片過程中的影響因素:組織固定時福馬林的濃度,固定時間的長短,烤片時溫度高低及烤片時間等對PCNA的抗原性都有影響。固定液濃度過高,固定時間過長,烤片溫度過高,烤片時間過長均會降低PCNA的抗原性乃致使抗原性消失[1,2]。4)免疫組化染色過程中的影響因素:免疫組化染色過程中所用抗體不同,所得PCNA結果不同;微波爐加熱能恢復PCNA的抗原性,增強切片的免疫組化染色效果[37],使用微波爐處理切片,能增加檢測的數值;另外抗體的滴度,內源性過氧化物酶封閉情況,DAB顯色時間長短,蘇木素襯染的背景深淺等均會影響染片的效果,產生假陰性或假陽性,使檢測結果發生變化。5)結果判斷的影響:由於每個人所定的陰陽性染色標準不同,選取視野不同,計數細胞總數不同,也造成了一定的人為偏差。
由於實驗中存在以上諸多影響因素,不同作者在肺癌中所研究出的結果或在不同腫瘤中所研究出的結果,都難以對照相比,因此PCNA的免疫組化研究有必要採用統一的標準,減少實驗誤差和人為偏差,使彼此的結果具有可比性。
總之,無論在整個腫瘤方面,還是單在肺癌這一方面,PCNA的研究都是較多的,得出了許多有臨床套用價值的結果,但由於腫瘤本身的變異性及人們研究方法的差異,致使所得結果存在一些爭議,這有待進一步驗證,以便能達到一致的結論,套用於臨床,指導臨床實踐

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