《基於Rep-RBE高效位點特異性整合的基因治療系統研究》是依託揚州大學，由許正新擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於Rep-RBE高效位點特異性整合的基因治療系統研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：許正新
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
基因治療可能是遺傳病主要或唯一的希望，但其安全性和有效性卻一直困擾著該領域的發展。本課題以B型血友病為研究對象，利用我們在先前的探索性研究中發現的具有單一位點整合功能的Rep-RBE核心元件建立的位點特異性整合轉基因體系,檢測評估攜有hFIX的載體在模型動物體內的動力學特徵，揭示攜有hFIX目的基因的質粒的分布、轉錄、翻譯、毒性、免疫反應等一系列的動力學過程和在主要分布器官中的位點特異性整合情況，並根據實驗結果在安全性和有效性方面對該系統進行進一步最佳化和改造。通過此項研究，有望建立一種既可以減少病毒性載體的隨機插入的潛在性危險以及因為免疫因素無法多次使用的限制，又可以克服質粒載體不能使外源基因長期、穩定、有效地表達的缺點的新的基因治療方法，並為該系統最終在基因缺陷性疾病治療和有安全性需求的轉基因操作中的運用提供理論貯備和技術支持。
結題摘要
我們以B型血友病為研究對象，利用我們在先前的探索性研究中發現的具有單一位點整合功能的Rep-RBE核心元件，構建了一個由肝特異性定位元件（以下簡寫為h）、肝特異性啟動子（HP）和位點特異性元件（RBE）組成的具有位點特異性整合功能的新的位點特異性轉基因質粒系統（pRBE-h-HP-hFIX等），在體外將此質粒與Rep蛋白表達質粒共轉染HEK293, A549, HepG2, L02 細胞，體內則將前述兩種質粒以高壓尾靜脈快衝的方式注射入轉有人AAVS1基因的小鼠體內，結果顯示：體外實驗中，不同來源的細胞間比較，hFIX表達水平在HepG2和L02細胞中高於A549和HEK293；在轉染的四種細胞中，同組比較，pRBE-HCR-hAAT-hFIX的hFIX表達量比pRBE-CMV-hFIX高，但其間並無顯著差異；然而，在轉基因動物體內，該質粒攜帶的目的基因的表達水平卻更高，而且持續時間更長，給藥後的240天檢測仍然可達正常人水平的1%以上，顯示出一定的臨床套用前景；體內AAVS1區域的位點特異性整契約時也被檢測到。與此同時，與質粒注射相關的肝臟毒性和由於目的基因表達產物導致的免疫原性也呈現出一過性的，短暫的，可逆的變化，顯示出該給藥系統能滿足基因治療中的安全性的要求，但其目的基因的表達水平仍有待進一步提高。該質粒系統給藥後在肝、心、肺、脾、腎等主要器官、組織中均有分布和表達，但以肝和心為最多。相關的研究成果已整理成文並且投出，其中，一篇綜述已經發表，一篇論文已被接收，即將付刊；一篇論文正處於修改階段，此外，還就此項目申請了一項專利。圍繞著此項目開展，培養了三名研究生，其中，兩名已經畢業。
