《基於FRET技術血清RNase A的檢測及其在腫瘤診斷套用中的研究》是依託北京大學，由王曉霞擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於FRET技術血清RNase A的檢測及其在腫瘤診斷套用中的研究
- 項目負責人：王曉霞
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
核糖核酸酶A（RNase A）是血清中一個重要組分，但目前仍沒有一種可以靈敏定量檢測血清中RNase A的方法。根據申請人所在實驗室在小核酸降解方向研究中所揭示的RNase A對雙鏈RNA降解的位點特異性，我們選取了具有血清特異性切割位點（CA/UG和UA/UA）的siRNA作為檢測RNase A活性的特異性底物，設計了基於螢光共振能量轉移（FRET）原理的RNase A活性檢測方法。通過此方法檢測小RNA分子是否被RNase A降解的狀態，進一步可以檢測RNase A活性，檢測靈敏度可達10-8mg/ml。在對11種腫瘤303例病人血清以及128例健康人對照的初步研究中發現胃癌、結腸癌和肺癌中RNase A活性顯著下降。本申請項目擬最佳化FRET方法，擴大樣本量，進一步探討血清中RNase A與腫瘤發生髮展、分類和預後之間的關係，這將對RNase A作為一項腫瘤診斷標記物具有重要指導意義。
結題摘要
核糖核酸酶A(RNase A)被證明與癌症發生髮展相關，而囿於靈敏特異的RNase A檢測方法，RNase A在腫瘤患者血清中的變化水平在文獻報導中差異較大。基於申請人所在實驗室在小核酸降解方向所揭示的RNase A對雙鏈RNA降解的位點特異性，選取了具有血清特異性切割位點（CA/UG和UA/UA）的siRNA作為檢測RNase A活性的特異性底物，設計了基於螢光共振能量轉移（FRET）原理的RNase A活性檢測方法。通過檢測小RNA分子是否被RNase A降解的狀態，可以檢測RNaseA活性和含量。本項目對RNase A檢測方法進行了深入最佳化，同時建立了ELISA法和Biotin標記法作為比較，研究表明FRET方法具有更好的靈敏性和特異性。在對11種腫瘤303例病人血清以及128例健康人對照的初步研究中發現胃癌、肝癌、胰腺癌、食管癌、卵巢癌、宮頸癌、膀胱癌、腎癌和肺癌中RNase A活性顯著下降，而在乳腺癌和結腸癌中RNase A變化不大。我們進一步擴大樣本量，獲得包括胃癌、結腸癌和肺癌的樣本743例，為探討血清中RNaseA與腫瘤發生髮展的關係奠定了基礎。在對75例具有完善病理資料樣本分析中，胃癌、結腸癌和肺癌中RNase A活性顯著下降，乳腺癌中RNase A變化不大。血清中RNase A與腫瘤類型、預後之間的關係有待大樣本驗證和隨訪資料完整後進行後續研究。同時，我們對切割位點化學修飾對siRNA兩條鏈的活性影響進行了系統的研究。結果發現，siRNA一條鏈上第9、10位的甲氧乙基（2’-O-MOE）修飾可以通過影響siRNA兩條鏈在RNA誘導的沉默複合體（RISC）中的裝載量，提高siRNA修飾鏈的活性，降低未修飾鏈引起的脫靶效應。siRNA一條鏈第9、10位的2’-O-MOE修飾與另一條鏈第14位的甲基（2’-O-Me）修飾聯合，可以發揮協同作用，更好的提高siRNA的特異性。該研究為設計RNase A 的降解底物做了有益理論補充和指導原則。在項目執行過程中，相關研究凝集為7篇研究論文，申請人參與編寫專著2部，作為成員獲得北京市科學技術獎三等獎1項。
