《基於CRISPR/Cpf1的Rhodopsin突變型視網膜色素變性基因治療研究》是依託北京大學，由杜瑋擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：基於CRISPR/Cpf1的Rhodopsin突變型視網膜色素變性基因治療研究
- 項目負責人：杜瑋
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視網膜色素變性（RP）是主要的遺傳性致盲病之一，目前尚缺乏有效的治療手段。視紫紅質（RHO）基因突變是導致RP最常見的病因，以第23位脯氨酸突變為組氨酸（P23H）最為常見。P23H 導致的進行性光感受器細胞和色素上皮細胞死亡，主要為RHO基因的功能獲得性突變和顯負性突變所導致，單純地導入正常基因的並不能達到治療的目的。 “抑制和替換”的治療方式（先使用一定的技術手段抑制或者剔除功能獲得性突變和顯負性突變的產物，然後再補充功能正常的基因進行治療），或者使用基因編輯手段直接糾正原突變位點才有望進行有效治療。因此，本項研究探索使用靶向RHO的CRISPR/Cpf1載體敲除RHO突變體，同時將正常的RHO基因遞送至視網膜光感受器細胞內進行RP的基因治療；或者使用靶向RHO基因P23H突變位點的CRISPR/Cpf1載體載體，同時提供一段與靶點序列同源的供體DNA，對突變位點進行精準的修復。
結題摘要
視網膜色素變性（RP）是主要的遺傳性致盲疾病之一，目前尚缺乏有效的治療手段。視紫紅質（Rhodopsin）基因突變是導致視網膜色素變性最常見的病因，以第23位脯氨酸突變為組氨酸（P23H）最為常見。P23H 導致的進行性光感受器細胞和色素上皮細胞死亡，主要為RHO基因的功能獲得性突變和顯負性突變所導致，單純地導入正常基因的並不能達到治療的目的。 “抑制和替換”的治療方式（先使用一定的技術手段抑制或者剔除功能獲得性突變和顯負性突變的產物，然後再補充功能正常的基因進行治療），或者使用基因編輯手段直接糾正原突變位點才有望進行有效治療。本研究成功構建了AAV-CRSIPR/Cpf1-RHO-KO和AAV-RHO雙病毒載體。通過視網膜下注射，靶向RHO的CRISPR/Cpf1載體敲除RHO突變體，同時將正常的RHO基因遞送至視網膜光感受器細胞內。通過H-E染色，免疫螢光染色，RT-PCR，western blot，ERG檢測，我們證實了雙病毒載體使用靶向RHO基因AAV-CRSIPR/Cpf1-RHO-KO載體，敲除RHO基因P23H突變鼠模型中視網膜光感受器細胞內的RHO突變體，同時使用AAV-RHO載體將正常的RHO基因遞送至視網膜光感受器細胞內，通過“抑制和替換策略”可以有效地治療 P23H突變導致的RP，並且治療效果可以維持較長時間，能夠為RP或者其他眼部遺傳疾病的基因治療提供理論依據和實驗證據，具有很好的臨床套用前景。
