基於顆粒表面橋式擴增的核酸多重檢測技術研究

《基於顆粒表面橋式擴增的核酸多重檢測技術研究》是依託廈門大學，由張師音擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：基於顆粒表面橋式擴增的核酸多重檢測技術研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張師音
• 依託單位：廈門大學

項目摘要

多重PCR因其高靈敏度與特異性的特點在血液篩查、遺傳病檢測等諸多核酸診斷領域具有十分重要的意義。然而，目前的多重PCR，僅靠引物設計與體系調整很難做到各靶標獨立、互不干擾的擴增，也限制了其可同時擴增的靶標數目。本研究引入固相顆粒表面的核酸擴增技術，使得每個靶標的擴增集中於以特定固相顆粒為載體的表面，從根本上解決多重PCR引物間相互干擾問題；並結合管式對流PCR技術與xMAP技術，解決固相顆粒沉降與超多重擴增產物檢測的難點，最終建立一種新型的多重PCR擴增與檢測平台，可廣泛套用於癌症檢測、傳染病檢測、遺傳病鑑定、血液篩查、科學研究等諸多領域，為核酸多靶標檢測帶來革命性的突破。

結題摘要

多重PCR因其既具備高靈敏度高特異性，又具備可一次檢測多個靶標的特點，在血液篩查、病原體鑑定、伴藥診斷、遺傳病檢測等眾多方面具有十分廣泛的套用。然而目前在臨床中套用的主流多重PCR方法很難做到各靶標獨立、互不干擾的擴增；此外，PCR儀螢光通道的數量也大大限制了可在一個反應中同時檢測的重數。針對上述問題，本研究建立了一種在螢光編碼微球上標記引物，在對流PCR運動流場中完成微球表面橋式擴增，並套用xMAP技術對微球進行解碼和產物分析的多重核酸檢測方法。闡明了引物標記密度與擴增效率之間的關係、固相顆粒表面、引物、酶、雜交探針之間相互位阻與擴增效率的之間的關係。建立了既能保障穩定流場又能提供固相擴增最適溫度場的對流PCR反應參數；並在上述基礎之上，建立了通用的固相顆粒表面多重擴增方法，該方法比xMAP方法靈敏度高約100倍。