《基於誘導宿主細胞釋放DNA的皂苷佐劑作用機制研究》是依託浙江大學，由孫紅祥擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於誘導宿主細胞釋放DNA的皂苷佐劑作用機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：孫紅祥
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
TSA是從中藥遠志中篩選到的皂苷化合物。本項目擬基於誘導宿主細胞釋放DNA (TSA-DNA)開展TSA佐劑作用機制研究。通過分析細胞死亡情況、死亡途徑以及DNA釋放量，探討TSA誘導的細胞死亡與DNA釋放之間的關係。通過檢測特異性抗體效價、抗原特異性刺激淋巴細胞增殖反應、細胞因子分泌能力以及T細胞細胞因子反應，評價TSA-DNA在TSA佐劑效應中的作用。通過分析炎性因子含量，免疫細胞募集、抗原攝取、加工處理、提呈能力，研究DNase I處理對TSA誘導先天性免疫應答的影響。採用小鼠表達譜晶片篩選四頭肌中表達差異的mRNA和lncRNA，分析“lncRNAs–轉錄因子–靶基因”三元關係，篩選潛在lncRNA，以siRNA和TALENs技術驗證其功能，鑑定與皂苷佐劑作用相關的信號轉導通路及信號分子，揭示皂苷佐劑作用的分子機制，以期發現介導佐劑效應的新基因，為佐劑作用機制研究開闢新思路和新型佐劑設計提供新靶標。
結題摘要
通過分析細胞死亡情況、死亡途徑以及DNA 釋放量，探討TSA誘導的細胞死亡與DNA 釋放之間的關係。通過檢測特異性抗體效價、脾細胞增殖反應、NK細胞活性、卵清蛋白免疫小鼠遲發性超敏反應以及肌注部位免疫細胞募集情況，評價TSA-DNA在TSA佐劑效應中的作用。採用小鼠成肌C2C12細胞為模型，檢測細胞增殖、細胞死亡類型、促炎性因子基因和蛋白表達水平以及基因表達譜變化，研究桔梗皂苷D佐劑活性涉及的潛在信號傳導途徑。桔梗皂苷可以誘導caspase-1依賴性的細胞毒和瞬時炎症反應。原位局部阻斷caspase-1可降低桔梗皂苷D對卵清蛋白的佐劑作用。機制研究發現桔梗皂苷D可顯著提高C2C12細胞胞內Ca2+水平，促進JNK和p38磷酸化從而激活caspase-1。採用小鼠表達譜晶片檢測二種皂苷（TSA和AJS）單獨或聯合不同抗原肌注誘導局部組織轉錄組的時效變化，以加權基因共表達網路分析，鑑定皂苷特異性基因模組，篩選皂苷特異性lncRNA，通過lncRNA-DNA結合trans機制篩選lncRNA的潛在靶基因，預測lncRNA的生物學功能，闡明皂苷佐劑作用的體內機制及信號轉導特點。發現了一個新的lncRNA—lncRNA-SC，採用RACE方法和克隆確定lncRNA-SC的的全長序列，體外翻譯系統分析蛋白編碼能力，質核分離技術進行定位分析，採用獲得性和缺失性研究方法揭示了其生物學功能。LncRNA-SC是一條位於小鼠17號染色體、全長為1480 nt、含二個內含子的lncRNA，其能調控C2C12細胞的增殖、死亡、遷移以及炎症應答基因的轉錄。
