《沙眼衣原體新的免疫優勢抗原CT143生物學特性研究》是依託中南大學，由王潔擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：沙眼衣原體新的免疫優勢抗原CT143生物學特性研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王潔
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
沙眼衣原體是一類專性細胞內寄生原核微生物，具有廣泛的致病譜。合成分泌自身蛋白與宿主細胞相互作用，繼而干擾宿主細胞的生物學行為，是衣原體在宿主細胞中生長和致病的關鍵。申請者前期建立了沙眼衣原體蛋白質組資料庫及衣原體感染人體後的體液免疫應答譜，從全基因組範圍內發現了15個新的衣原體免疫優勢抗原（能被50％以上患者的免疫血清識別）。其中CT143是一個新的免疫原性最強的衣原體特異蛋白，84％的患者血清中均檢測到高濃度抗CT143抗體，提示CT143蛋白能被有效提呈給宿主細胞識別並誘導產生免疫應答。本課題擬進一步探討CT143的生物學特性，深入研究CT143在衣原體感染細胞內的表達特徵，與宿主細胞的相互作用機制及其生物學功能，並進一步評估CT143 所誘導的免疫應答的特點及其保護效果。本課題將為沙眼衣原體與宿主細胞相互作用機制研究提供新的實驗依據，從而為衣原體感染性疾病的防治提供新的研究策略。
結題摘要
沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,簡稱Ct)是一類專性細胞內寄生原核微生物，具有廣泛的致病譜。目前有關衣原體致病因子與保護性因子知識的缺乏已經成為了當前衣原體致病機制研究及疫苗研究的瓶頸。我們前期建立了沙眼衣原體蛋白質組資料庫及衣原體感染人體後的體液免疫應答譜，從全基因組範圍內發現了15個新的衣原體免疫優勢抗原（能被50％以上患者的免疫血清識別）。其中CT143是一個新的免疫原性最強的衣原體特異蛋白，本課題套用雜交瘤技術成功獲得了穩定分泌抗CT143蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株並製備了相應單克隆抗體。間接免疫螢光法及Western Blot法檢測了內源性CT143蛋白表達的時空特徵，發現衣原體CT143蛋白定位於包涵體內，屬於衣原體中晚期表達基因產物，是原體（Elementary body，EB）相關蛋白。構建CT143過表達慢病毒表達載體，通過包裝獲得過表達CT143基因的慢病毒顆粒，感染Hela229細胞，用嘌呤黴素進行篩選，獲得穩定過表達CT143的Hela229細胞株，間接免疫螢光法檢測發現CT143穩定過表達組細胞中衣原體包涵體數目顯著少於Hela229細胞組和空載體轉染陰性對照細胞組，提示CT143蛋白可能對Ct感染和生長有一定的抑制作用。ELISA檢測發現CT143蛋白能夠刺激THP-1分化的巨噬細胞分泌促炎症細胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α。給小鼠接種CT143蛋白＋佐劑以評估外源性CT143蛋白誘導的免疫應答。ELISA法檢測小鼠脾細胞培養上清中IFN-γ和IL-4的水平、小鼠血清中抗體的滴度和亞類、以及小鼠陰道沖洗液中sIgA的水平，發現CT143重組蛋白在小鼠體內誘導產生了以Th1應答為主的細胞免疫、體液免疫及黏膜免疫，TC0420（鼠肺炎衣原體MoPn的CT143同源體）重組疫苗具有部分保護作用，其誘導產生的免疫有利於小鼠生殖道內衣原體感染的清除，但不能減輕衣原體感染後小鼠上生殖道組織的病理損傷。這些結果為進一步明確免疫優勢抗原CT143蛋白的生物學特性及探討衣原體的致病機制和疫苗的研製提供了實驗依據。
