《基於噬菌體展示短肽的多溴聯苯醚非競爭性免疫分析》是依託中國農業大學，由許艇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：基於噬菌體展示短肽的多溴聯苯醚非競爭性免疫分析
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：許艇
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
多溴聯苯醚（PBDEs）是一類全球性的環境污染物質，其中4～6溴代聯苯醚在環境和生物樣品中分布廣且毒性大。本項目針對目前PBDEs儀器分析方法複雜且效率不高的缺點，以環境中幾種重要的4～6溴代聯苯醚（BDE-47, 99, 100, 153和154）為目標，研究一種新的免疫分析方法。本研究首先需要製備PBDEs特異性的多克隆抗體，再以抗體-PBDEs免疫複合物為模板配基，利用噬菌體展示肽庫技術篩選出識別免疫複合物的特異性短肽，建立基於噬菌體展示短肽的PBDEs非競爭性免疫分析方法，並套用於環境樣品實測，最後將該方法與儀器分析方法比較，評價它的實用性。本研究建立的新方法將克服目前PBDEs競爭性免疫分析法靈敏度低且特異性差的缺陷，它可作為精密儀器分析方法的補充，對PBDEs的環境污染實施快速有效監控。
結題摘要
本項目以毒性較大且在環境中分布廣泛的2,2′,4,4′-四溴聯苯醚（BDE-47）為目標，研究基於噬菌體展示短肽的BDE-47免疫分析方法。通過在BDE-47化學結構式中引入含4個碳臂的丁酸功能基團，舟籃獲得了BDE-47的半抗原，將半抗原與鑰孔血藍蛋白（KLH）偶聯作為免疫原，免疫小鼠製備幾種BDE-47的單克隆抗體。將5-(2,4-二溴苯氧)戊酸與辣根過氧化物酶（HRP）偶聯製備了酶標半抗原，與其中一種單克隆抗體4F2組合，建立了BDE-47直接競爭性ELISA方法，標準曲線的抑制中濃度（IC50值）和最低檢測濃度（LOD值）分別為1.4 ng mL-1和0.1 ng mL-1，ELISA方法與其它測試化合物的交叉反應≤5.8%。將該方元少膠法套用於土壤、河床底泥以及室內灰塵中BDE-47的檢測，平均添加回收率、重複性和再現性分別為92-126%、8-19%和台擊催9-25%，將ELISA方法與氣質聯用方訂辯想鴉法同時檢測44個環境樣品，兩種方法的檢測結果有較好的相關性(R2 = 0.79–0.85)。以另一種單克隆抗體1H2為篩選模板，總共從展示環7肽、線性7肽和線性12肽的3種隨機肽庫篩選出25個陽性噬菌體克隆，能與單抗1H2特異結合或與單抗1H2-BDE-47免疫複合體結合。利用其中一株與單鑽探設料抗1H2特異結合的噬菌體C7-1建立了競爭性噬菌體ELISA，標準曲線抑制中濃度IC50=6.8 ng mL-1；同時利用另一株與免疫複合體結合的噬菌體XC7-8建立了非競爭性噬菌體ELISA，標準曲線中使OD值升高的中濃度EC50=4.2 ng mL-1。競爭和非競爭噬菌體ELISA方法與BDE28、BDE99和BDE100的臘射棵交叉反應分別為0.3–0.8%和1.3–6.5%。將兩種噬菌體ELISA方法都用於污泥和魚肉樣品中BDE-47的分析，競爭性方法的平均添加回收率、重複性和再現性分別為96–124%, 4.5–11%和5.5–16%。非競爭性方法的相應值分別為97–120%, 3.5–10%和7–15%。兩種方法對18個實際樣品的分析結果基本一致，另將噬菌體ELISA與氣相色譜-電子捕獲檢測器的離子阱質譜敬促剃儀（GC/ITMS）對比分析，結果也相近。本項目研究結果表明，利用噬菌體展示技術可以方便高效的篩選出針對小分子污染物的特異性短肽，並建立不同的噬菌體ELISA方法。
