《地鼠克隆胚胎Kcnq1ot1 印記基因的DNA甲基化研究》是依託吉林大學，由唐博擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：地鼠克隆胚胎Kcnq1ot1 印記基因的DNA甲基化研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：唐博
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
克隆效率低是動物克隆技術存在的重要問題。核不完全重編程與克隆效率密切相關。而印記基因DNA甲基化導致的印記異常則是核不完全重編程的重要原因之一。地鼠可作為生殖學、腫瘤學等研究方向的優良動物模型，本課題組已對地鼠體細胞核移植進行研究並取得一定成果。在此基礎上，本項目擬運用核移植技術和原位雜交、Southern Blotting等分子生物學技術，對正常地鼠胚胎和克隆地鼠胚胎Kcnq1ot1印記基因的表達、Kcnq1ot1的DNA甲基化和基因印記的相關性、以及Kcnq1ot1對Mash2、CDKN1C、KCNQ1三種基因印記情況的影響進行研究。從而闡明克隆動物中Kcnq1ot1 DNA甲基化與基因印記丟失的關係，揭示Kcnq1ot1對相關三種基因的印記調控規律。這將為克隆動物核不完全重編程的機理研究奠定堅實的理論基礎，為提高克隆效率提供詳實的實驗依據，同時也為克隆動物的表觀遺傳研究提供了新思路。
結題摘要
本項目在前期研究工作的基礎上，最佳化了地鼠體細胞核移植技術的各個環節，從表觀遺傳學角度研究了地鼠胚胎體外發育阻滯的主要原因，獲得了金黃地鼠KCNQ1基因cDNA全序列，且分析了其在地鼠早期胚胎和成年組織中的表達。結果顯示，在對地鼠卵母細胞進行顯微操作時應將取卵時間控制在hCG後13~15h，採用10μs，300V/mm電脈衝和6-DMAP的聯合刺激，可以獲得較好的克隆胚胎的激活和發育效果；胚胎在體外發育到2-細胞期時出現阻滯現象，體外胚胎中HDAC1和乙醯化H4K5表達水平顯著低於體內胚胎中的表達水平，使得合子激活基因HSP70的轉錄水平降低，且HDAC1的轉錄水平也顯著下降，影響了合子基因組的激活，導致胚胎體外發育阻滯；克隆出的金黃地鼠KCNQ1基因cDNA全序列長3050bp，其中包括了2010bp的編碼區，88bp的5’非翻譯區，979bp的3’非翻譯區和13個Poly A尾部結構；KCNQ1基因在金黃地鼠早期胚胎的各發育階段和成年地鼠的心臟、肝臟、脾臟、肺臟和腎臟中均有表達。結果表明，本研究體系顯著提高了克隆地鼠胚胎在2-細胞之前的激活率和發育率，且發現KCNQ1基因在金黃地鼠早期胚胎髮育過程中起了重要的調控作用，這將為進一步研究克隆胚胎的體外發育機制，提高克隆胚胎的體外發育率奠定堅實的基礎。
