《反因子核酸酶靶向編輯HER-2基因的分子影像學評價》是依託蘇州大學，由肖莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：反因子核酸酶靶向編輯HER-2基因的分子影像學評價
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：肖莉
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，原癌基因HER-2的改變與乳腺癌發生髮展密切相關。目前靶向腫瘤基因治療及其在體多模態成像監測是分子影像學的研究熱點。本項目擬採用已有前期工作在愛滋病基因治療基礎研究中使用的新型分子反因子核酸酶，特異性靶向剪輯HER-2基因，研究阻斷其信號通路達到靶向治療乳腺癌的目的。實驗採用螢光顯微鏡、動物活體成像儀、MRI多模態成像監測反因子核酸酶剪下效率和對腫瘤的治療作用。研究內容包括：1.研發高效剪輯HER-2基因的反因子核酸酶，經腺病毒包裝，行離體及在體癌細胞抑制和殺傷實驗；2.用多模態成像監測反因子核酸酶對HER-2的剪輯效率和對癌細胞的抑制、殺傷能力，與螢光顯微鏡、流式細胞儀和病理學等檢查相對照，評價多模態成像對該技術的監測效果和反因子核酸酶技術用於治療乳腺癌的可行性。
結題摘要
乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，原癌基因HER-2的改變與乳腺癌發生髮展密切相關。目前靶向腫瘤基因治療及其在體多模態成像監測是分子影像學的研究熱點。本項目擬採用新型分子核酸酶，特異性靶向剪輯HER-2基因，在細胞水平和動物水平觀察核酸酶的剪下效率和對乳腺癌的治療作用。研究結果如下：1.構建了靶向編輯乳腺癌相關基因HER2的TALENs和CRISPR/Cas9核酸酶系列質粒。2. 建立TALENs和CRISPR/Cas9核酸酶的原核和真核系統評估體系。原核評估體系是基於藍白斑篩選技術，當核酸酶靶向剪下目的基因後，重組菌落的顏色由藍色變為白色，實現通過觀察菌落顏色的改變評估核酸酶的靶效應和脫靶效應；真核體系是基於博來黴素抗性基因為報告基因的評估體系，當核酸酶靶向剪下目的基因後，細胞可恢復博來黴素抗性，在博來黴素抗生素篩選下保持存活，實現通過觀察細胞的死亡和存活評估核酸酶的靶效應和脫靶效應。3. 構建了穩定表達CAS9蛋白的乳腺癌BT474細胞，並篩選了具有高效剪下HER2基因活性sgRNA的CRISPR/Cas9核酸酶。4. 構建了乳腺癌裸鼠模型，通過小動物超聲成像觀察了經CRISPR/Cas9核酸酶靶向編輯HER2基因的實驗組較對照組成瘤時間晚，成瘤範圍小。上述結果提示，核酸酶特異性靶向HER2基因組編輯技術可在細胞水平和動物水平抑制乳腺癌的發生髮展，為乳腺癌的臨床基因治療及多模態成像監測乳腺癌的病程提供了一定的基礎實驗數據。
