核酸雜交技術根據檢測目的和檢測手段的不同，可分為液相雜交、固相雜交及細胞內定位(原位)雜交。
基本介紹
- 中文名：反向斑點雜交法
- 外文名：Reversedot blot
- 縮寫：RDB
- 提出者：Saiki
內容簡介
固相雜交又可分為斑點雜交、凝膠電泳印跡轉移雜交。而反向斑點雜交(reverrsedotblot，RDB)是Saiki等提出的一種斑點雜交技術，該技術較正向斑點雜交和凝膠電泳印跡轉移雜交具有快速、簡便、高敏感性、特異性強的特點，尤其是基因分型、基因突變檢測，病原體的檢測等方面有其獨特的優勢。
反向斑點雜交法利用生物素等標記的探針和特異性擴增PCR產物(靶DNA序列)雜交。但是不同於一般的斑點雜交。一般的點印跡雜交是靶DNA固定於硝酸纖維素膜或尼龍膜上，標記的探針和靶DNA雜交顯色。這種方法每次雜交反映只能判斷待測DNA是否含有某一種探針的同源序列，對於某些基因座位可能含有十幾至幾十個等位基因(如HLA�DRB位點或地中海貧血突變基因等)，用這種點雜交方法就會很繁雜，甚至可能做不到。而RDB正是解決了這一難題。
RDB是先將待用的探針分別點到硝酸纖維素膜或尼龍膜上，每個探針一個點並編上號，再將待測的DNA樣本(一般是經PCR特意性擴增的產物，在PCR引物5’�端預先進行生物素標記，使擴增產物相應標記有生物素)與之雜交，這樣待檢樣本就會與具有同源序列的探針結合，經洗滌去除未結合的DNA樣本，由於待測的DNA樣本具有生物素類的標記物，結合了待測DNA的探針點上就帶有生物素類的標記物，再經相應的顯色反應就能顯出雜交信號。這樣一次就可以判斷某一基因座位的大部分或全部等位基因，因此利用這樣的工作原理還可以用於基因分型、病原體檢測、腫瘤研究等。
