基本介紹
- 中文名：厭氧培養
- 外文名：anaerobic culture
- 術語：生物
- 微生物：厭氧菌
- 特點 ：微生物置於與分子態氧隔絕狀態
- 工藝：厭氧培養罐、厭氧袋、厭氧手套箱
分類,培養工藝,
分類
由於目的不同而有不同的培養方法，可分為以下幾大類：
（1）與空氣隔絕或儘量少接觸空氣的培養法：在三角瓶瓶頸以下裝滿液體培養基，通過煮沸把溶解的空氣趕出後，立即冷卻進行細菌接種。由於發酵而產生H2和CO2時，就可進一步確認是厭氧細菌。另外，把瓊脂培養基加入普通試管約10厘米高度進行穿刺培養，或移植於液體培養基和固體斜面培養基上以後，再加一層液體石臘或礦物油，用這些方法可防止與空氣接觸。
（2）除掉空氣的方法：把微生物裝入耐壓容器中進行真空培養，或充滿二氧化碳、氫氣、氮氣、氬氣等。這些氣體可把事先混入的微量氧氣除掉。在氫存在時，可用置換後飛濺火花等方法來除掉殘存的氧氣
（4）在培養基中加入還原劑（如0.1%的巰基乙酸鈉鹽，0.01%的硫化鈉等）。以上各種方法進行適當組合就能進一步確認厭氧細菌。為了確定厭氧性，可在鹼性條件下加入葡萄糖並加熱，與配製的還原型次甲藍（美藍）溶液一起加入，保持脫色狀態即可。
培養工藝
厭氧培養——微生物厭氧培養
1．可利用厭氧產氣袋法進行厭氧培養。
規格2.5L的產氣袋只能將2.5L容積內的氧氣完全吸收，轉化成二氧化碳，同理，3,5L的產氣袋能吸收3.5L容積的氧氣。微需要產氣袋和二氧化碳產氣袋亦是如此，為達到相應的氧氣濃度和二氧化碳濃度，不僅容積要固定，放置的培養物數量也基本要裝滿，在出廠前都根據計算設定好了的，所以，培養也需要在設定的條件下進行。
日本三菱的厭氧培養罐有兩種規格：2.5L（13.5*19.7*9.5cm,容納12隻9cm標準培養皿），配套使用1隻2.5L規格的厭氧產氣袋；7.0L（21.3*28.0*11.2cm,容納42隻9cm標準培養皿），配套使用3隻2.5L規格的厭氧產氣袋或者2隻3.5L的厭氧產氣袋。兩種都是長方體，原廠的產氣袋培養後不會產生負壓，直接可以打開，所以不需要泄壓孔。
2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑膠袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。塑膠袋透明而不透氣，內裝氣體發生管（有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、乾燥劑。放入已接種好的平板後，儘量擠出袋內空氣，然後密封袋口。先折斷氣體發生管，後折斷美蘭指示劑管，命名袋內在半小時內造成無氣環境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態，可以孵育。
3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今為止國際上公認的培養厭氧菌最佳儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內進行操作，故名。箱側有一交換室，具有內外二門，內門通箱內先關著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關上外門進行抽氣和換氣（H2，CO2，N2）達到厭氧狀態，然後手伸入手套把交換室內門打開，將物品移入箱內，關上內門。箱內保持厭氧狀態，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘餘氧化合成水的原理。該箱可調節溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內，還可放入解剖顯微鏡便於觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適於作厭氧細菌的大量培養研究，大量培養基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均系自動調節。
