原位末端凋亡法

TUN EL 技術， 即脫氧核苷酸末端轉移酶( Terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT )介導的dUTP 缺口末端標記(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL ) 技術， 是目前原位檢測細胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法， 已廣泛用於生物、醫學研究領域。

基本介紹

• 中文名：原位末端凋亡法
• 套用：生物、醫學研究領域。
•  技術：TUN EL 技術
• 介導：脫氧核苷酸末端轉移酶

TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一種用來檢測細胞凋亡(apoptosis)的分析方法.細胞凋亡有一項重要的特徵為細胞內的DNA會碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測DNA片段的產生,所以可以傳達細胞凋亡的訊息.TdT為terminal deoxynucleotidyl transferase,此種酵素可以在沒有DNA模板的情形下,連結核甘酸到DNA的3'-OH處.1992年,以色列科學家Gavrieli等人將TdT引為為標定DNA片段的一個酶,自此衍生出TUNEL此項技術.TUNEL的好處是可以在細胞凋亡發生的早期,即可偵測到DNA片段的產生,並且可以直接使用在組織切片上,觀察細胞凋亡發生的位置.所以TUNEL目前為廣泛接受與使用的一種細胞凋亡的分析方法.

細胞凋亡的研究方法有形態學方法、DNA電泳、末端標記技術凋亡細胞膜改變分析、細胞凋亡酶學分析和流式細胞儀分析方法（flow cytometry, FCM）等。以往對細胞凋亡的研究常常採用形態學方法進行研究，如光學顯微鏡和電子顯微鏡來觀察，以出現凋亡小體即判斷為凋亡細胞。但這種現象出現晚，對凋亡細胞亦難以做出精確的定量分析。DNA聚合酶I、Klenow酶介導的原位末端標記技術和TdT酶介導的生物素化dUTP缺口末端標記技術(terminal oxynucleotidyl transferase mediated dUTP biotin nick end labeling, TUNEL )是近年來發展出現的細胞凋亡原位檢測技術。細胞凋亡的特徵是內源性核酸內切酶被激活，細胞自身的染色質或DNA被切割，出現單鏈或雙鏈缺口，並產生與DNA斷裂點數目相同的3′-OH末端。原位末端標記技術可以檢測到形態改變之前的凋亡細胞，敏感性高，特異性強，為凋亡細胞計數提供了基礎