北京大學醫學實驗系列教材·生物化學與分子

內容簡介

《北京大學醫學實驗系列教材·生物化學與分子生物學實驗教程》可作為本科生的普通生物化學與分子生物學實驗教材。高級實驗收集了RT-PCR、GST、pulldown、Northern Blot等分子生物學最新研究技術，有一定難度，可作為生物化學與分子生物學專業研究生的實驗教材。

圖書目錄

總則
實驗室規則
基本操作
常用儀器簡介
基本實驗
蛋白質分離與純化
實驗一血清的鹽析及含量測定
實驗二凝膠過濾層析
實驗三醋酸纖維素膜電泳
實驗四聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
實驗五等電聚焦電泳

酶學實驗
實驗一底物濃度對酶促反應速度的影響
實驗二酶濃度對酶促反應速度的影響
實驗三 pH對酶促反應速度的影響
實驗四溫度對酶促反應速度的影響
實驗五抑制劑對酶促反應速度的影響
實驗六乳酸脫氫酶粗提液的製備及活力測定

核酸提取與分析
實驗一質粒DNA的微量快速提取
實驗二質粒DNA的酶切與鑑定
實驗三 DNA重組與鑑定
實驗四聚合酶鏈反應技術（PCR）

高級實驗
實驗一生肌蛋白的誘導表達和提取
實驗二蛋白質免疫印跡分析（Western Blot）
實驗三免疫共沉澱
實驗四 GST pull-down分析
實驗五肝細胞總RNA提取及鑑定
實驗六 RT-PCR技術
實驗七探針標記
實驗八 Southern Blot
實驗九 Northern Blot
實驗十電泳遷移率變動分析（EMSA）
附錄化學試劑的規格與保管
主要參考文獻

文摘

基本實驗
蛋白質分離與純化
蛋白質是一切活細胞和有機體的重要組成成分。細胞和體液中蛋白質都是成千上萬種相混合而存在，要分析單個蛋白質的結構和功能需先分離純化蛋白質。通常利用蛋白質的兩性解離、等電點、紫外吸收等理化性質，採取鹽析、電泳、層析等方法對蛋白質進行分離、純化。蛋白質分離、純化過程一般可分為以下幾個步驟：
（一）材料的預處理及細胞破碎
分離提純某一種蛋白質時，首先要把蛋白質從組織或細胞中釋放出來，並保持其天然狀態及活性。因此要採用適當的方法將組織和細胞破碎。常用的破碎組織細胞的方法有：①機械破碎法，可使用高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等設備；②滲透破碎法，即在低滲條件使細胞溶脹而破碎；③反覆凍融法，生物組織經凍結後，細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破；④超音波法，使用超音波振盪器使細胞破碎；⑤酶法，用溶菌酶破壞微生物細胞等。
（二）蛋白質的抽提
通常選擇適當的緩衝液將蛋白質提取出來。抽提所用緩衝液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應根據欲製備的蛋白質的性質而定。如膜蛋白的抽提需加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、TritonX-100等），使膜結構破壞，利於蛋白質與膜分離。在抽提過程中，應注意在低溫下操作，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質的變性。

北京大學醫學實驗系列教材·生物化學與分子

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序言

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