化學發光探針技術

化學發光探針技術，一種新型的食品檢驗技術，用於檢驗食品中的病原體，是一種快速、簡便、靈敏準確的檢測技術，作為標準檢測方法的初篩技術，是解決上述問題的有效手段之一。

基本介紹

• 中文名：化學發光探針技術
• 定義：一種新型的食品檢驗技術
• 解釋：用於檢驗食品中的病原體
• 類別：化學

建立背景

中國的食品生產加工企業數量多，規模小，較分散，而且為數較多企業過分追求利潤法律意識淡薄，社會責任心不強導致其產品質量良莠不齊，因此食品質量監督檢測手段就尤為重要。中國食品衛生監管的檢測手段主要依據國家標準或行業標準規定方法進行，雖然這些方法準確可靠，但這些方法一般都需要建設專門的微生物檢測實驗室，配備專業的檢測技術人員，需要較長的檢測周期，由此造成的檢測成本過高，缺乏時效性等問題，使一些突發的食品安全事件不能迅速得以解決，因此開發出一種適用於廣大基層食品監管部門的現場檢測和診斷技術尤顯必要。

由吉林出入境檢驗檢疫局承擔的國家質檢總局科研課題《套用化學發光探針及免疫金標法檢測食品中多種致病菌的研究》在2011年獲得了國家質檢總局“科技興檢”三等獎。該課題建立的化學發光探針檢測技術能夠快速檢測食品中常見的四種病原菌：空腸彎曲菌、單核細胞增生性李斯特氏菌、大腸桿菌O157和金黃色葡萄球菌。

原理

化學發光探針技術的原理是互補的核酸單鏈會特異性識別並結合成穩定的雙鏈複合物。這一檢測系統利用一個標記有化學發光物的單鏈DNA探針，可以特異性的識別和結合目標微生物的核糖體RNA。微生物中的核糖體RNA釋放出來後，化學發游標記的DNA探針就與之結合形成穩定的DNA-RNA雜合體。標記的DNA-RNA雜合體會與非雜交探針分離，並在化學發光檢測儀中進行測量。樣本的檢測結果通過計算與陰性對照進行比較得出結果。利用化學發光劑標記和檢測核酸使得許多非放射性標記檢測的靈敏度達到甚至超過了同位素標記測定。

在眾多的化學發光體系中，套用最多的化學發光體主要有三類：增強魯米諾發光體系、吖啶類化合物發光體系和鹼性磷酸酶催化的1，2-二氧環己烷發光體系。吉林檢驗檢疫局建立的化學發光技術使用吖啶酯標記核酸探針。

操作

利用化學發光雜交保護分析的原理檢測空腸彎曲菌、單核細胞增生性李斯特氏菌、大腸桿菌O157和金黃色葡萄球菌4種致病菌特異性RNA序列，這種方法無需物理分離，利用吖啶酯標記DNA探針，通過核酸雜交保護分析法，即套用人工合成的靶DNA保守區的寡核苷酸，在合成時引入一個烷氨基的手臂，經活化後接上吖啶酯，製成化學發光探針。
雜交後無需分離步驟，而是利用差分水解來鑑別，即加入鹼性溶液，游離的發光探針遇鹼水解失去發光特性，而與特異性目的片段結合的探針形成DNA-RNA雜交體，由於吖啶酯是平面結構很容易進入雙螺旋的內部而獲得雜交保護，水解速度緩慢（半衰期達10分鐘以上），仍有發光性能，可以在發光儀上顯示化學發光信號，從而實現對病原菌的檢測。

套用優勢

化學發光探針技術可在30分鐘內快速確定病原體，並可直接於固體或液體培養基上鑑定目標微生物。該方法可直接套用於國外生產的LEADER 50i檢測儀上，儀器自動注入檢測試劑，立刻測量標記物所產生化學反應的化學發光強度，並自動計算結果及列印報告，該檢測方法敏感性高，特異性強，檢測成本低，操作簡便、快速，對中國食品安全快速檢測和監控工作具有重要意義，具有廣泛的推廣前景。