剪接因子SRSF1對子宮內膜癌糖代謝的調控及作用機制

《剪接因子SRSF1對子宮內膜癌糖代謝的調控及作用機制》是依託上海交通大學，由文善雲擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：剪接因子SRSF1對子宮內膜癌糖代謝的調控及作用機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：文善雲
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

子宮內膜癌（endometrial carcinoma，EC）是女性生殖系統中最常見的腫瘤之一，但發病機理不清。越來越多研究表明RNA剪接在腫瘤發生、發展過程中發揮作用。SRSF1作為剪接因子的一種，參與多種惡性腫瘤進展，然而它在EC中的作用及機制目前未知。我們前期研究發現，與正常子宮內膜相比，SRSF1的RNA和蛋白表達水平在EC中異常升高；對256例EC組織晶片染色發現，在惡性度較高的鱗癌、透明細胞癌者中SRSF1蛋白表達量更高； siRNA干擾其表達，能抑制EC細胞的增殖和侵襲行為、降低糖代謝相關指標如乳酸分泌量和葡萄糖消耗量；加入糖酵解抑制劑能逆轉SRSF1對EC細胞的作用。本研究將進一步採用轉錄組測序等方法，明確SRSF1在EC中的功能及可能調控的靶基因剪接體，深入探討SRSF1通過怎樣的分子機制影響EC糖代謝。本研究將為進一步揭示EC發病機制奠定基礎，為其有效防治提供新思路。

結題摘要

本課題組前期在子宮內膜癌細胞系HEC-1A和AN3CA中瞬轉干擾SRSF1基因的表達，能抑制增殖和侵襲功能，糖代謝的兩個指標乳酸分泌量和葡萄糖消耗量也均降低，加入糖酵解抑制劑2-脫氧葡萄糖能逆轉SRSF1的增殖和侵襲作用。 將RNA干擾SRSF1的質粒轉染子宮內膜癌細胞AN3CA和HEC-1A，嘌呤黴素篩選出穩定干擾SRSF1的細胞AN3CA-sh-SRSF1和HEC-1A-sh-SRSF1。用CCK-8實驗檢測細胞增殖能力，結果同瞬轉干擾的結果（附屬檔案1A，B）。將過表達SRSF1的質粒轉染子宮內膜癌細胞HEC-1B和 KLE，嘌呤黴素篩選出穩定過表達SRSF1的細胞HEC-1B-lenti-SRSF1和 KLE -lenti-SRSF1。用CCK-8實驗檢測細胞增殖能力，促進增殖（附屬檔案1C，D）。將HEC-1A-sh-SRSF1和KLE -lenti-SRSF1皮下成瘤，干擾SRSF1基因的表達能抑制增殖，過表達SRSF1能促進增殖（附屬檔案1E，F）。 瞬轉干擾組和NC組做RNA seq檢測，分析結果發現SRSF1與糖代謝通路密切相關，與該通路有關的基因UGP2、UG8B和DDX42表達水平明顯升高。同時分析CLIP資料庫和RNA seq數據發現兩者差異基因的交集中與代謝相關的基因有DDX42和PKM。後續為明確SRSF1在子宮內膜癌發病機制中的作用，將設計引物定量PCR和凝膠電泳驗證上述基因是否參與該過程，以及用什麼轉錄本，並進一步在動物實驗驗證。設計UGP2、UG8B 、DDX42、DDX42 和 PKM引物，定量PCR和凝膠電泳實驗未能驗證上述基因參與糖代謝過程。