分子轉染

分子轉染是DNA小片段插入體細胞或細胞系的過程。若此DNA未與宿主細胞DNA整合而獲表達,稱“瞬時轉染”;若與宿主細胞DNA整合併隨後者的複製而複製稱“穩定轉染”。常規轉染技術可分為兩大類,一類是瞬時轉染,一類是穩定轉染(永久轉染)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數。

儘管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中機率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過一些選擇性標記,如來氨丙基轉移酶(APH;新黴素抗性基因),潮黴素B磷酸轉(HPH),胸苷激酶(TK)等反覆篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大,許多轉染方法需要最佳化DNA與轉染試劑比例,細胞數量,培養及檢測時間等。

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