提純免疫球蛋白的方法很多，常見的有離子交換法、凝膠過濾法和親和層析法等。離子交換法是根據分子電荷密度來分離純化免疫球蛋白，常用DEAE-cellulose和DEAE-Sephadex柱。
基本介紹
- 中文名：凝膠免疫過濾
- 外文名：Gel filtration
- 方法：離子交換法、凝膠過濾法等
- 優點：重現性好，簡單易行
離子交換法,詳細介紹,結論,
離子交換法
蛋白質在溶液離子強度較低時可與離子交換介質中帶相反電荷的極性基團結合，當pH或離子強度改變時，又可被同電性的離子競爭置換解脫。離子交換層析就是根據電荷性的差異進行分子的分離，它使帶電荷的蛋白質結合在帶異種電荷的基質上，通過改變洗脫液的鹽濃度或pH值來改變蛋白質與基質之間的結合程度，結果使不同類的蛋白質被分別洗脫下來。離子交換層析是一種成熟的技術，它的重現性好，簡單易行，具有解析度高、容量大、收穫率高的優點，而且具有濃縮效應，通常作為多步層析中的第一步（李長彪等，2005）。不同的抗體具有不同的等電點，即使是同一亞類的免疫球蛋白也會有相當大的差異，因此，並沒有一個通用的程式進行離子交換層析。
詳細介紹
凝膠過濾法是基於免疫球蛋白相對分子質量大於其它蛋白質來分離的，SephadexG100-200。凝膠過濾是一種溫和的純化方法，對樣品分子的活性沒有影響，它是根據樣品中物質分子大小不同，在通過多孔凝膠介質時達到分離目的。分子小的能進膠，路程長，後流出；分子大的不能進膠，路程短，先流出。對IgG類的抗體來說，凝膠過濾常用來去除電荷性與單克隆抗體相同的雜質，如轉鐵蛋白等。凝膠過濾可以用來去除去純化材料的雙體、四聚體和多聚體，也可以用於純化方案的最後一步，用於最終產品儲存前的脫鹽緩衝轉換。不同凝膠介質的分離範圍是不同的，應選擇分離抗體分子大小範圍內的相應凝膠介質。另外，粗顆粒的凝膠介質速度快，細顆粒的凝膠介質解析度高。凝膠過濾對層析柱有要求，理想的層析柱的直徑與長度之比是1：25～100（齊順章，1986）。當用同樣直徑的層析柱分離2種以上的物質時，長層析柱比短的解析度高；當用同樣長度的層析柱分離2種以上的物質時，長層析柱比短的解析度高；當用同樣長度的層析柱分離2種以上的物質時，層析柱直徑大的比小的解析度高。
結論
親和層析法是依生物高分子所特有的生物活性進行分離，提純和濃縮的特異性吸附層析技術，是一種有效的分離方法，常用瓊脂糖親和層析法。親和層析具有高效、快速、純化結果好的優點，但它有以下幾個缺點：需要高純度的親和偶聯配體；洗脫液可能損害目的蛋白活性，配體可能從柱子上脫落下來；成本高費用大（張龍翔等，1982）。常用的配體有3類：A蛋白、G蛋白、抗原或特異性抗單克隆體。
