凝結酶是一種由葡萄球菌產生的酶，具有類似凝血酶原激酶的活性，能使經檸檬酸或草酸處理過的血漿凝固。金黃色葡萄球菌產生的結合凝固酶，結合在細胞壁上，使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白附著於細菌表面，發生凝集反應。
基本介紹
- 中文名：凝結酶實驗
- 外文名：Coagulase test
- 來源：葡萄球菌
- 反應：血漿凝固
- 作用：鑑別葡萄球菌有無致病性
- 類型：結合凝固酶，游離凝固酶
凝結酶,試驗方法原理,試驗方法,玻片法,試管法,結果,套用,血漿凝結酶實驗,血漿凝結酶試驗的醫學意義,
凝結酶
血漿凝結酶是能使含有肝素等抗凝劑的人或兔血漿發生凝固的酶類物質，致病株大多數能產生，是鑑別葡萄球菌有無致病性的重要指標。傳統豆腐加工一般採用鹽類凝固劑和酸凝固劑，很少使用酶凝固劑。但鹽類凝固劑和酸凝固劑製得的產品存在一些問題，例如用鹽滷製作的豆腐具有極佳的風味，但是豆腐持水性差，而且產品放置時間不宜過長；用石膏做成的豆腐保水性能好，組織光滑細膩，出品率高，但製品有一定的殘渣而帶有苦澀味，缺乏大豆香味；由內酯做成的豆腐品質較好，質地滑潤爽口，彈性大，持水性好，但口味平淡，偏軟，不適合煎炒，且略帶酸味。研究表明酶凝固劑製得的凝固物口感細膩，口味較酸，凝固溫和，條件較鹽凝固溫和，容易控制。更重要的是，豆漿凝固酶還會在後期對大豆蛋白進行持續降解，從而降低硬度，改善口感。
試驗方法原理
致病性葡萄球菌可產生兩種凝固酶。一種是結合凝固酶，結合在細胞壁上，使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白而附著於細菌表面，發生凝集：可用玻片法測出。另一種是分泌至菌體外的游離凝固酶。作用類似凝血酶原物質，可被血漿中的協同因子激活變為凝血酶樣物質，而使纖維蛋白原變成纖維蛋白，從而使血漿凝固，可用試管法測出。
試驗方法
玻片法
1、取生理鹽水兩滴，分別置於潔淨載玻片的兩端。
2、 以滅菌接種環分別取金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌培養物少許，分別與玻片上的生理鹽水製成均勻的細菌懸液，觀察有無自凝現象。
3、於每滴細菌懸液內加入兔血漿各一滴，混勻。如出現顆粒狀凝集現象即為陽性。如不立即發生凝集，可稍待一，二分鐘，並輕輕搖動玻片，加速反應，若無凝集時則為陰性。
試管法
1、取含有1：4 稀釋的兔血漿0.5 毫升的試管2 支，分別接種金黃色葡萄球菌與表皮葡萄球菌斜面培養物各三接種環，並應細細研磨，使其均勻混懸於血漿中。
2、置37 ℃水溫箱中1～4小時，觀察結果，將試管微微傾斜，血漿成凍膠樣凝塊者為陽性，血漿仍為液狀者為陰性。
結果
玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現而鹽水中無自凝現象判為陽性；試管法以血漿凝固判為陽性。
套用
作為鑑定葡萄球菌致病性的重要指標，也是葡萄球菌鑑別時常用的一個試驗。
血漿凝結酶實驗
取肉湯培養物0.3mL同0.5mL凝固酶試驗兔血漿於8mm×100mm試管內充分混合,置36±1℃培養,定時觀察是否有凝塊形成,至少觀察6h,以內容物完全凝固,使試管倒置或傾斜時不流動者為陽性。試驗中需同時做巳知陽性和陰性對照。血漿凝固酶（coagulase）：大多數致病性金黃色葡萄球菌能產生一種血漿凝固酶（游離血漿凝固酶），能加速人或兔血漿的凝固，保護病原菌不被吞噬或免受抗體等的作用。凝固酶是一種類似凝血酶原(prothrombin)的物質，通過血漿中的激活因子變成凝血樣物質後，才能使血漿中的纖維蛋白原變為纖維蛋白因而血漿凝固。金黃色葡萄球菌還產生第二種血漿凝固酶（凝聚因子），結合在菌細胞上，在血漿中將球菌凝集成堆，無需血漿激活因子，而是直接作用於敏感的纖維蛋白原。在抗吞噬作用方面，凝聚因子比游離血漿凝固酶更為重要。
血漿凝結酶試驗的醫學意義
凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌是人類重要致病菌，可引起社區和醫院感染。感染常以急性、化膿性為特徵，如果未經治療，感染可擴散至周圍組織或經菌血症轉移至其他器官，常見的感染有癤、癰、外科切口、創傷等局部化膿性感染和骨髓炎、化膿性關節炎、肺炎、心內膜炎、腦膜炎等全身性感染。金黃色葡萄球菌的致病性主要與各種侵襲性酶類（如血漿凝固酶、透明質酸酶、磷脂酶、觸酶、耐熱核酸酶）和多種毒素（溶血毒素、殺白細胞素等）有關。某些菌株產生的腸毒素可引起食物中毒，表現為急性胃腸炎。噬菌體Ⅱ組金黃色葡萄球菌產生的剝脫毒素（或稱表皮溶解素）可引起人類燙傷樣皮膚綜合徵，多見於新生兒、幼兒和免疫功能低下的成人。患者皮膚呈瀰漫行紅癍和水皰形成，繼以表皮上層大量脫落。由噬菌體Ⅱ型金黃色葡萄球菌產生的毒性休克綜合徵毒素－1（toxic chock syndrome toxin1,TSST－1），引起機體發熱並增加對內毒素的敏感性，該毒素屬超抗原家族，刺激T細胞誘發TNF和LI－1，可致機體多個器官系統的功能紊亂或引起毒性休克綜合徵（TSS）。
凝固酶陰性葡萄球菌是人體皮膚黏膜正常菌群之一，是醫院感染的主要病原菌，其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心內膜炎、靜脈導管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關節感染等；腐生葡萄球菌則是女性尿路感染的重要病原菌，其他凝固酶陰性葡萄球菌也已成為重要的條件致病菌和免疫受損患者的感染菌。感染的發生常和細菌產生夾膜多糖或糖萼有關，它增強細菌與外來物質（生物性瓣膜、導管等）表面的粘附或在其表面形成一層生物膜而保護細菌對抗殺菌物質作用。葡萄球菌的耐藥性已演變為醫院感染和臨床治療的棘手問題。
