凍乾皮上劃痕用鼠疫活菌苗

凍乾皮上劃痕用鼠疫活菌苗。

規程,菌種,菌苗製造,凍乾,成品檢定,保存與效期,使用說明書,接種對象,用法,反應,禁忌,注意事項,保存,

規程

菌種

1.1 菌種來源
用弱毒的EV菌株,由中國藥品生物製品檢定所分發或經同意。
1.2 菌種檢定
凍乾菌種在生產前每年需要檢查一次培養特性、生化特性、噬菌體裂解試驗及安全性。
1.2.1 培養特性
在瓊脂平皿上,37℃培育44~48小時之菌落應為粗糙型,在肉湯中液面有薄菌膜,管底有沉澱物,肉湯透明。
1.2.2 生化特性
應分解葡萄糖,產酸不產氣,石蕊牛乳輕度變紅,在甘油培養基內不產酸不產氣。
1.2.3 噬菌體裂解試驗
將EV菌種塗於瓊脂平皿上,加滴度為10-6以上的鼠疫噬菌體1滴,於28℃培育44~48小時,在噬菌體流過的地方應無本菌生長。
1.2.4 安全試驗
用體重300~400g豚鼠3隻,每隻皮下注射120億菌(28~30℃培育44~48小時的培養物)。在注射後第6天解剖1隻,第21天解剖2隻,檢查注射部位、脾、肝、肺,並用脾、肝、肺及心血進行培育。其中心血和肺培育應無本菌生長。肉眼檢查病變,注射部位可見充血,浸潤變為膿瘍,肝和脾可有丘疹狀結節,肺部不應有鼠疫特異病變為安全試驗合格。肺部如有顯著病變時,套用同量豚鼠複試,若仍有顯著病變時,菌種應廢棄。
1.2.5 免疫力試驗
用體得200~250g的豚鼠10隻,每隻皮下注射70萬菌(28~30℃培育44~48小時的培養物)一次。於20~25天后進行攻擊,每隻皮下感染鼠疫強毒菌200個MLD。。同時用3組豚鼠作對照,每組3隻,各組豚鼠皮下分別注射0.5、1及2個MLD的毒菌。免疫組及對照組至少觀察25天。免疫動物存活不少於8隻,而對照動物注射1個及2個MLD全部死亡時,免疫力試驗為合格。
1.3 菌種保存
菌種應凍乾保存,凍乾菌種保存於2~8℃暗處。

菌苗製造

2.1 製造鼠疫活菌苗之實驗室在生產期間應專用,不得作其他細菌工作,絕對禁止保存鼠疫毒菌。
2.2 製造用培養基
製造菌種可用pH6.8~ 7.2的厚氏瓊脂培養基或其他適宜的培養基。
2.3 原液製造
2.3.1 第1代菌種
啟開乾燥菌種加入生理鹽水溶解後,接種於厚氏瓊脂培養基上,於28~30℃培育44~48小時為第1代。放2~8℃保存可使用半個月。
2.3.2 第2代菌種
用生理鹽水將第1工菌種洗下,接種足夠量的種子瓶,於28~30℃培育44~48小時為第2代,供大批生產用。不得用第3代菌種生產。
2.3.3 大量接種
第2代菌種經肉眼檢查無雜菌後,加入適量生理鹽水洗下菌苔,製成均勻的菌懸液,用此菌懸液接種培養瓶,於28~30℃培育44~48小時後,逐瓶肉眼檢查,有雜菌者廢棄。
2.3.4 採集
用由蔗糖、明膠、硫脲、味素及尿素組成的保護液洗下菌苔(洗菌前將凝固水倒去)或將菌苔刮入上述保護液內,製成原液。每瓶原液均應按《生物製品無菌試驗規程》進行純菌試驗,不得有雜菌生長。
2.3.5 合併、稀釋、分裝
用4層紗布或絹布將純菌試驗合格之原液過濾合併,按中國細菌濁度標準比濁後用保護液稀釋,使稀釋後每人份含菌數7億~9億。然後按10或20人份分裝於安瓿,並進行凍乾。採集至凍乾,原液不得超過7天,合併後的原液應按《生物製品無菌試驗規程》進行純菌試驗。
2.4 菌苗分批
同一日培育的原液於同一次冷凍乾燥者為1批。如1批有數瓶,應分亞批。

凍乾

菌苗分裝後應立即在-30℃以下進行冷凍。乾燥時間可根據水含量及活菌數來決定。乾燥完畢後進行真空封口,亦可充氮封口。

成品檢定

4.1 物理性狀檢查
本品為白色或淡黃色疏鬆體。用真空測定器檢查安瓿應為真空。菌苗水分含量不得超過3%。加入生理鹽水後應在半分鐘內溶解成均勻懸液。
4.2 濃度測定
菌苗經稀釋後,按中國細菌濁度標準(7億/ml)測定濃度。皮上劃痕用菌苗每人份含菌數為7億~9億。
4.3 活菌數測定
由生產部門會同質量檢定部門進行。每亞批取3支安瓿,加生理鹽水溶解後,混勻比濁,稀釋至10億/ml。再按10倍系列稀釋至10-6。用10-6稀釋度懸液接種5個平皿,每個平皿接種0.1ml。塗勻後放28~30℃培育2~3天,計算活菌數。凍乾後活菌率不少於45%為合格。如低於45%時可複試,如仍不合格則該批菌苗應廢棄。
4.4 純菌試驗
每批菌苗按《生物製品無菌試驗規程》進行。
4.5 菌落、菌形檢查
應呈典型粗糙型菌落,塗片鏡檢,為革蘭氏陰性桿菌
4.6 安全試驗
由生產部門會同質量檢定部門進行。每亞批菌苗取2支安瓿,用生理鹽水溶解後,用體重300~400g豚鼠2隻,每隻皮下注射120億菌,第6天稱豚鼠體重(不應比原體重減輕1/5以上)並取其中1隻解剖,另1隻觀察到21天解剖。檢查項目及要求均同1.2.4項。
4.7 免疫力試驗
每10批菌苗抽檢,10批以下者每3~5年至少檢查1次。由生產部門會同質量檢定部門進行。用體重250~300g豚鼠10隻,每隻皮下注射5000萬菌,注射後20~25天以200個MLD的鼠疫毒菌進行皮下攻擊。同時有3組豚鼠作對照,每組3隻,分別於各組豚鼠皮下注射0.5、1和2個MLD。各組動物於注射後,觀察25天。免疫動物活存不少於8隻,而對照動物注射1個和2個MLD全部死亡時,免疫力試驗為合格。

保存與效期

應保存於2~8℃暗處。自凍乾後活菌數檢定合格之日起效期為1年。

使用說明書

嚴禁注射!
本品系採用鼠疫菌弱毒菌株經培育後凍乾製成。用於預防鼠疫。
本品為白色或淡黃色的疏鬆體。另入氯化鈉注射液後在半分鐘內完全溶解。

接種對象

疫源地或通過疫源地的人員,每年應免疫1次。

用法

1.菌苗按所載人份量加入氯化鈉注射液溶解。每安瓿20人份加入1.0ml,10人份加入0.5ml,溶解後應在3小時內用完。
2.在上臂外側上部皮上劃痕接種。在接種處用酒精棉消毒,待酒精幹後滴上菌苗(每人份滴0.05ml)。用消毒針劃成“井”字。劃痕長度約1~1.5cm,應以劃破表皮稍見血跡為宜。劃痕處用針塗壓10餘次,使菌液充分進入痕內。接種後局部應裸露至少5分鐘。
3.14周歲以下兒童,菌苗滴2處劃2個“井”字,14周歲以上者菌苗滴於3處劃3個“井”字。“井”字間隔2~3cm。

反應

接種後反應輕微,少數人劃痕處出現浸潤,一般不影響勞動,個別人體溫可能稍有增高。

禁忌

1.患嚴重疾病、免疫缺陷症者及用免疫抑制劑治療者。
2.妊娠期或前6個月授乳期。

注意事項

1.本品僅供皮上劃痕用,嚴禁注射。
2.安瓿有裂紋、標籤不清、製品過期失效者不可使用。

保存

應保存於2~8℃暗處。

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