冷凍蝕刻（freeze－etching）技術是在冷凍斷裂技術的基礎上發展起來的更複雜的復型技術。如果將冷凍斷裂的樣品的溫度稍微升高，讓樣品中的冰在真空中升華，而在表面上浮雕出細胞膜的超微結構。當大量的冰升華之後，對浮雕表面進行鉑一碳復型，並在腐蝕性溶液中除去生物材料，復型經重蒸水多次清洗後，撈在載網上作電鏡觀察。
基本介紹
- 中文名：冷凍蝕刻技術
- 外文名：freeze－etching
- 優點：可使其微細結構接近於活體狀態
- 缺點：造成樣品的人為損傷
技術優點,技術缺點,操作方法,
技術優點
冷凍蝕刻(Freezeetching)技術是從50年代開始發展起來的一種將斷裂和復型相結合的製備透射電鏡樣品技術，故而亦稱冷凍斷裂(Freezefracture)或冷凍復型(Freezereplica)。
它的優點在於：
①樣品通過冷凍，可使其微細結構接近於活體狀態；
②樣品經冷凍斷裂蝕刻後，能夠觀察到不同劈裂面的微細結構，進而可研究細胞內的膜性結構及內含物結構；
③冷凍蝕刻的樣品，經鉑、碳噴鍍而製備的復型膜，具有很強的立體感且能耐受電子束轟擊和長期保存。
技術缺點
它的缺點是：冷凍也可造成樣品的人為損傷；斷裂面多產生在樣品結構最脆弱的部位，無法有目的地選擇。
操作方法
1.預處理取新鮮組織塊，大小為1.5～3～5mm，用2.5%戊二醛固定1～3小時。為防止冰晶形成，用30%甘油生理鹽水浸泡8～12小時。 2.冷凍斷裂是在冷凍條件下使樣品變得又硬又脆，用刀劈裂樣品，暴露觀察面。因為是用刀劈裂的樣品，斷裂往往發生在細胞被凍結後較脆弱的部位，多數是沿細胞及細胞器的膜裂開。由於斷裂面是凸凹不平的，所以圖像立體感強。冷凍斷裂時，刀的作用在於劈裂，而不是切割，所以刀刃不必鋒利，但不能有缺口、油污和水份，還需保持清潔乾燥。冷凍復型的斷裂操作要在真空中進行，是因為真空對熱傳導性差，能使樣品較長時間維持在較恆定溫度下進行斷裂操作，同時也便於進行下步的蝕刻處理。
