《全基因組CRISPR/Cas9文庫篩選洋橄欖葉素抑制自噬的靶基因》是依託華中科技大學，由趙雪嬌擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：全基因組CRISPR/Cas9文庫篩選洋橄欖葉素抑制自噬的靶基因
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：趙雪嬌
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
卵巢癌是一類複雜的異質性腫瘤，儘管診斷和治療不斷進步，但患者5年生存率仍然不超過40%。細胞自噬在腫瘤的發生髮展中起著重要作用，靶向自噬通路的抗腫瘤藥物研發被視為一種很有潛力的新策略。申請者通過對華北製藥集團有限公司（NCPC）微生物來源的純化合物庫進行系統篩選，發現洋橄欖葉素（elaiophylin）能夠促進自噬體的累積，但是會在自噬過程的晚期階段阻斷自噬流，並最終抑制卵巢癌細胞的自噬。這種新型自噬抑制劑會最終導致細胞死亡，並在體內發揮單藥抗腫瘤活性，但是其抑制自噬的具體作用靶點尚未闡明。因此，本項目擬通過CRISPR/Cas9文庫篩選出elaiophylin抑制自噬的靶點並驗證其有效性，闡明靶點參與elaiophylin抑制自噬的分子機制。本研究將進一步揭示elaiophylin抗腫瘤活性的具體機制，而且可為研發新的自噬抑制劑提供指導。
結題摘要
申請者通過對華北製藥集團有限公司（NCPC）微生物來源的純化合物庫進行系統篩選，發現洋橄欖葉素（elaiophylin）能夠促進自噬體的累積，但是會在自噬過程的晚期階段阻斷自噬流，並最終抑制卵巢癌細胞的自噬。但是其抑制自噬的具體作用靶點尚未闡明。尋找elaiophylin抑制自噬的具體靶點，將會進一步擴充elaiophylin的套用，而且可為研發新的自噬抑制劑提供指導。在本項目研究中，我們通過過CRISPR/Cas9文庫篩選確定了一種磷脂酶C---PLCG2作為潛在的研究靶點。既往研究報導顯示，細胞內鈣離子信號與細胞自噬密切相關，鈣離子信號可正向或負向調控細胞自噬過程，同時，PLCG2作為磷脂酶C（PLC）家族的一員，參與調控細胞內鈣離子水平。本項目研究顯示CRISPR/Cas9敲除PLCG2可減弱elaiophylin抑制自噬的效應。同時，我們通過流式細胞學的方法（FACS）顯示elaiophylin可顯著升高細胞內鈣離子濃度。然而，敲除PLCG2可明顯降低elaiophylin導致的細胞內鈣離子濃度升高。總結來說，本項目通過CRISPR/Cas9文庫篩選，確定了elaiophylin抑制自噬的可能靶點為PLCG2，並驗證了其有效性，闡明了PLCG2可能通過調控細胞內鈣離子濃度參與elaiophylin抑制自噬的過程。本研究進一步揭示了elaiophylin抑制自噬的具體機制，而且可為研發新的自噬抑制劑提供指導，具有一定的套用前景。
