《內質網應激在視網膜色素變性中的作用研究》是依託北京大學，由楊麗萍擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：內質網應激在視網膜色素變性中的作用研究
- 項目負責人：楊麗萍
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視網膜色素變性是一組以感光細胞和色素上皮細胞進行性、選擇性喪失為特點的遺傳致盲眼病。本課題組前期研究工作顯示伴隨rd小鼠視網膜變性過程，內質網應激（ERS）通路相關蛋白在視網膜中的表達明顯增高。在此基礎上，本課題選用rd和rds兩種遺傳性視網膜色素變性動物模型，結合組織培養和細胞培養，用TUNEL、免疫螢光、Real-time PCR、蛋白印記和RNAi等方法，探討伴隨rd和rds小鼠視網膜色素變性過程，ERS通路蛋白在其中的表達變化；探討體外藥物誘導ERS通路活化是否可致感光細胞凋亡；探討體內用RNAi基因沉默技術消除突變蛋白的積聚對感光細胞凋亡的可能保護作用； 探討體內藥物抑制ERS誘導凋亡通路的活化對感光細胞凋亡的可能保護作用。以此論證ERS通路在視網膜色素變性感光細胞凋亡中發揮重要作用；用基因沉默技術消除突變蛋白的積聚及抑制ERS誘導凋亡通路的活化可對感光細胞凋亡發揮有效保護作用。
結題摘要
遺傳性視網膜變性是一組以感光細胞和色素上皮細胞進行性、選擇性喪失為特點的遺傳致盲眼病,是我國致盲的最主要病因之一，目前無有效療法. 本課題研究目的是探討遺傳性視網膜變性疾病中感光細胞凋亡的機制，為將來通過抑制凋亡以治療該類疾病提供理論依據。本課題選用rd和rds兩種動物模型，結合視網膜組織培養和661W視錐細胞培養，探討內質網應激通路在視網膜色素變性感光細胞凋亡中的作用，並探索套用基因沉默技術或內質網應激通路抑制劑治療該類疾病的可能性及套用前景。研究結果顯示: (1) 伴隨rd和rds小鼠視網膜變性過程，非摺疊蛋白反應通路活化，內質網應激反應蛋白激活，進而導致感光細胞變性凋亡; (2) 給予內質網應激通路調節劑或用基因沉默技術沉默突變蛋白的表達對rd小鼠的保護作用非常有限, 而且效果難以持久。通過本部分研究，豐富了人們對感光細胞凋亡機制的認識; 並提示我們，針對該類遺傳性疾病, 如果不能在基因水平進行修復難以達到持續有效的治療效果; 在致病基因診斷的基礎上進行靶向基因治療希望能為該類疾病的治療帶來曙光。 本課題組密切關注國際上在該領域的最新研究進展, 在有限的經費資助下，藉助於高通量測序平台，基於目標序列捕獲測序技術自主研發一款“遺傳性眼病基因診斷晶片”, 該晶片可有效捕獲36種常見眼科遺傳病的371個致病基因。本課題組藉助於該晶片並結合Sanger測序，已經完成300餘個遺傳性眼病患者或家系的基因檢測。結果顯示：（1）“遺傳性眼病基因診斷晶片”可為遺傳性眼病患者提供準確、快速的致病基因診斷，診斷陽性率為40-50%，並且高效、準確的分子診斷可協助疾病的臨床診斷；（2）PRPF31基因和CRB1基因分別是中國adRP和arRP患者中的常見致病基因之一，攜帶PRPF31基因突變的患者發生外顯不全可能性大；（3）RPGR基因突變基因型和臨床表型關聯分析結果顯示，發生於ORF15區靠近C末端的突變更易引起視錐細胞的損傷。通過本部分研究，為遺傳性眼病的臨床基因診斷奠定了基礎，為未來的臨床基因治療提供依據，基因診斷陰性的大家系樣本成為遺傳性眼病新的致病基因研究的寶貴資源。
