1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用於IgG定量測定的文章，使得1966年開始用於抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。
基本介紹
- 中文名：免疫酶標
- 外文名：Immune enzyme mark
- 類型：酶免疫組織化學技術
- 提出人：Engvall和Perlmann
基本原理,必要的試劑,ELISA的類型,
基本原理
它以酶作為標記物，與抗體或抗原聯結，與相應的抗原或抗體作用後，通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量，亦可用於組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學技術。
目前套用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗原或抗體吸附於固相載體，使隨後進行的抗原抗體反應均在載體表面進行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。
必要的試劑
(1)固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；
(2)酶標記的抗原或抗體，稱為"結合物"（conjugate）；
(3)酶反應的底物。根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。
ELISA的類型
（1）雙抗體夾心法
為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯製成的小管、小盤或小孔）上，然後加被測溶液，倘樣品中有相應抗原，則與抗體在載體表面形成複合物。洗滌後加入酶標記的特異性抗體，後者通過抗原也結合到載體的表面。洗去過剩的標記抗體，加入酶的底物，在一定時間內經酶催化產生的有色產物的量與溶液中抗原含量成正比，可用肉眼觀察或分光光度計測定。
（2）雙位點一步法
在雙抗體夾心法測定抗原時，如套用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如套用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的套用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
（3）間接法測抗體
為了檢測抗體可用間接法。使抗原吸附於載體上，然後加入被測血清，如有抗體，則與抗原在載體上形成複合物。洗滌後加酶標記的抗球蛋白（抗抗體）與之反應。洗滌後加底物顯色，有色產物的量與抗體的量成正比。
（4）競爭法
競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。
（5）捕獲法測IgM抗體
血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。
常用的酶有辣根過氧化物酶（HRP）和鹼性磷酸酶（AP），相應的底物分別是鄰苯二胺（OPD）和對硝基苯磷酸鹽，前者呈色反應為棕黃色，後者為藍色。可用目測定性，也可用酶標儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量。
