免疫磁珠細胞分選方法可以在幾分鐘內從複雜的細胞混合物中分離出很高純度的細胞。
基本介紹
- 中文名：免疫磁珠細胞分選
- 外文名： MACS MicroBeads
- 性質：名詞
- 分類：細胞
簡介,詳細信息,
簡介
被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場後，滯留柱內的磁性標記細胞就可以被洗脫出來，這樣就完全可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。
超順磁性的MACS MicroBeads 的體積很小，其直徑約為50nm，體積約小於真核細胞的一百萬份之一，可與病毒的大小相比。標記細胞上的微型磁珠即使在掃描電鏡照片上也幾乎看不到。磁性抗體和磁性標記物間的反應可在幾分鐘內完成。
由於微型磁珠的體積極小，所以不會對細胞造成機械性壓力，而且使孵育時間短，操作過程快。MicroBeads 形成一個穩定的膠體液，它們在磁場中既不沉澱又不凝聚。
微型磁珠的大小和它的組成成份（氧化鐵和多糖）使其可被生物降解，且不會激活細胞或影響細胞的功能和活力，細胞的生理功能也不變。磁珠不需要去除，因此，陽性分選出的細胞（即磁性標記細胞）可立即用於分析和隨後的實驗。
用MACS 細胞分選系統可以分離出非常純的細胞群體，而且有極好的回收率和存活率。依據細胞頻率和標記表達水平的不同，MACS分離細胞的純度可達95%-99.9%，回收率>90%。
詳細信息
免疫磁珠法分離細胞原理：
免疫磁珠法分離細胞是基於細胞表面抗原能與連線有磁珠的特異性單抗相結合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由於不能與連線著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。
免疫磁珠法分為正選法和負選法：
正選法－磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞
負選法－磁珠結合不需要的細胞，游離於上清液的細胞為所需細胞
一般而言，負選法比正選法的磁珠用量大
磁珠： 大小在0.1－0.45mm 包被了生產的高質量單抗磁珠已為白細胞亞群的分選所最佳化 將包被了特異性單抗的BD IMag磁珠加入細胞懸液，磁珠特異性地與有相應抗原的細胞亞群結合，通過分離得到的連有磁珠的細胞可直接用於功能試驗和用流式細胞儀檢測。
磁分離細胞的重要指標是：
純度和得率，這取決於磁珠所連線單抗的特異性和磁珠大小（磁性），然而太小的磁珠得率不高，太大的磁珠又會影響細胞活性，也無法直接上流式。
目前市場上有2種磁性細胞分離系統： Small particles (≈50 nm) － MACS Large particles (1200~4500 nm) －others（如Dynal）
提供的磁株,由Dynal公司提供大小約為200nm為中等大小磁株
小磁珠 優點：對細胞溫和，不影響分離細胞的後續培養，可直接上流式檢測，不影響散射光
小磁珠 缺點：需要很強的磁場來分離細胞，分離速度慢，得率不高，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行，成本昂貴
大磁珠 優點：技術簡單，分離可在試管中完成，易於增減細胞用量，速度快，得率高，成本低
大磁珠 缺點：對細胞造成機械壓力，影響其生物學活性，不利於分離後培養，純度低，阻塞FCM的噴嘴
