基本介紹
- 中文名：傳染性支氣管炎
- 外文名：HI
- 類型：抗原及血清
- 地區：荷蘭
介紹,材料,
介紹
血凝抑制方法基於IBV病毒能雞的凝集紅細胞（血凝素受體）的特性建立。抗原與抗體的結合阻斷了血凝作用。將抗體在96孔板上倍比稀釋，將標定的抗原稀釋成在4-8HA(IBV
樣品和樣品準備：
血清、血漿和蛋黃樣本可以使用，樣品在檢測前可以在-20℃保存。
注意：蛋黃樣本在冷凍前需作1:4-1:8預稀釋，樣本在56℃熱滅活30min可減少非特異反應。
材料
未稀釋的HI凍乾抗原陽性對照陰性對照（SPF血清）
磷酸鹽緩衝液（PBS）PH7.2-7.
41%紅細胞PBS懸液
移液器（25µl）
微孔板（U型底或V型底）
標定抗原
稀釋的抗原需要8單位HA，按下列程式：
用PBS從1:2、和1:3倍比稀釋25µl PBS+25µl抗原（=1:2,4,8,16,32,64 …….）
50µl PBS+25µl抗原(1:3,6,12,24,48,96……)
每孔加25µl PBS（血清量補償）每孔加入25µl 1%紅細胞懸液4℃孵育45-60min。讀板記錄完全凝集的最高稀釋度（HD）用公式計算HA單位:(HD1:2+HD1:3)/2=HA單位數計算所需稀釋度配製8HA-單位抗原液重複步驟1～7，檢查抗原計算舉例：HD1:2=64,HD1:3=96 ：(64+96)/2=80HA 稀釋度為1:10配製為8 HA單位抗原。檢測步驟
除A列（A1-A12）以外的孔加入25µLPBS在A列每孔中加入50µL血清（每板加12份血清）從A列向後倍比稀釋到H孔，滴度範圍為1:2(B列)-1:128(H列) 每孔加入標定好的HI-抗原25µL（見前文），輕敲板混勻。4℃孵育45-60min。每孔加入25µl 1%紅細胞懸液，輕敲板混勻。4℃孵育45min。讀結果並計算滴度（稀釋度）。滴度為完全抑制的最高血清稀釋度取2log，如1:128=7，1:32=5。
