基本介紹
- 中文名：催乳素酶聯免疫試劑盒
- 外文名：ResidueTestProlactin ELISA kit
- 催乳素：prolactin
- 用途：測定牛奶中崔乳品含量
簡介,套用,實驗原理,試劑盒提供的試劑,需要準備的設備及試劑,檢測步驟,試劑準備,標準溶液,測定程式,結果計算,特異性,檢測限,
百科名片
?>催乳素（prolactin，PRL）為腺垂體分泌的一種蛋白質激素，由199個胺基酸殘基所組成。其對乳腺與泌乳的作用主要為促進乳腺發育生長，引起並維持泌乳。
採用原理
競爭酶聯免疫分析法定量檢測牛奶和奶牛血清、血漿中的催乳素(Prolactin)。
簡介
泌乳素由垂體前葉分泌，是單鏈多肽激素，分子量近24,000。泌乳激素的釋放與合成通過催乳激素釋放和抑制因素，受神經內分泌的控制。女性催乳激素水平一般高於男性。其主要功能是促進乳房發育，維持乳汁分泌。懷孕期間，催乳激素水平增長到正常值的10到20 倍，產後3-4 周降到未孕水平。哺乳期母親催乳激素保持高水平，幾個月後血清濃度恢復到未孕水平。
套用
催乳素酶聯免疫試劑盒運用競爭抑制酶標免疫分析法定量測定牛奶中崔乳品含量。試劑盒中包含96次檢測所需酶聯免疫試驗試劑，包括標準溶液。檢測時間為45分鐘，檢測限為0.35ng/mL（ppb）。試劑盒回收率高於80%。
實驗原理
ResidueTestProlactin ELISA kit 催乳素酶聯免疫試劑盒測定的基礎是雙抗體夾心法，微孔板包被有針對催乳素的抗體，加入催乳素標準或樣品溶液，標準或樣品溶液中的催乳素作為抗原與抗體結合形成固相複合物，加入催乳素酶標記物，與固相複合物結合，沒有結合的酶標記物在洗滌步驟中被除去。將酶基質/發色劑加入到孔中，結合的酶標記物將無色的發色劑轉化為藍色的產物。加入反應停止液後使顏色由藍色轉變為黃色。在450nm測量，吸光強度與樣品中的濃度成正比。
試劑盒提供的試劑
每一個盒中的試劑足夠進行96個試驗（包括標準測定），盒中的材料如下：
1×96孔板（12條×8孔，可以拆分為單孔）包被有捕獲抗體。
6×標準溶液（1ml/瓶），凍乾粉
0ppb(0標準),，5 ppb，20ppb，50 ppb，100 ppb，200ppb，
1×酶標記物（11ml）,直接套用液
1×基質/發色劑（14ml），直接套用液
1×反應終止液（14ml），直接套用液，包含有0.5M硫酸
1×洗滌緩衝液（30ml，40×濃縮）
需要準備的設備及試劑
450nm濾光片的酶標儀
單道和多道微量加液器及吸頭
蒸餾水或去離子水
儲存條件
保存試劑盒於2 - 8°C，不要冷凍。
將不用的微孔板放進原錫箔袋中並且與提供的乾燥劑一起重新密封。
無色的發色劑對光敏感，因此要避光保存。
不要使用超過有效期的試劑盒。
不要交叉使用不同批號的試劑盒
樣品處理
牛奶樣品：
牛奶樣品需去除脂肪干擾，可30,000g以上離心力冷凍離心（2-8℃）30分鐘，除去脂肪層後檢測。
奶粉樣品需用雙蒸水10倍稀釋，30,000g以上離心力冷凍離心（2-8℃）30分鐘，除去脂肪層後檢測。
牛血清、牛血漿樣品：
採血後，室溫離心分離血清；血漿抗凝劑為EDTA、肝磷脂、枸緣酸鈉。
血清、血漿樣本在2-8 °C保質48小時。更長時間放-20°C冷凍。解凍的樣本實驗前應倒置幾次。
含疊氮納化物不能用於酶反應。
檢測步驟
試劑準備
使用之前將所有試劑回升至室溫(20- 25°C, 68 - 77°F)。
標準溶液
：
用雙蒸水1 ml對標準品復溶，復溶後2- 8°C可保存兩個月，- 20°C可保存更長時間。
洗滌緩衝液稀釋：
用雙蒸水40倍稀釋濃洗滌緩衝液，如30ml濃縮洗滌緩衝液，1170ml雙蒸水，稀釋後的洗滌緩衝液室溫可保存兩周。
測定程式
每次檢測都必須做標準曲線，根據試劑盒推薦的洗板步驟進行操作，試驗過程中不要讓板孔乾燥。
1.將足夠標準和樣品所用數量的孔條插入微孔架，並記錄標準及樣品的位置。
2.加入25μl的標準或處理好的樣品到各自的微孔中，每個標準和樣品應當做平行。
3.加入100μl稀釋的酶標記物到微孔底部，用手輕輕搖動微孔板混合，在室溫（20- 25°C, 68 - 77°F）下孵育30分鐘。
4.倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打（拍打三次）以完全除去孔中的液體，用洗瓶或多通道移液器向孔中充滿250μl稀釋後的洗滌緩衝液，輕輕拍打微孔板四周，倒出孔中的液體，完全除去孔中的液體，再重複操作洗滌步驟兩次以上。
5.加入100μl基質/發色試劑到微孔中，用手輕輕搖動微孔板混合，在室溫（20- 25°C, 68 - 77°F）下暗處孵育10分鐘。
6.加入50μl反應終止液到微孔中，用手輕輕搖動微孔板混合，在450nm處測量吸光度值以空氣為空白，必須在加入終止液後10分鐘內讀取光度值。
結果計算
：
計算標準、質控品和樣本的平均OD值。建立標準曲線，使用每一個標準品的OD值與其相對應的濃度值描點作圖。OD 值為縱軸（Y軸），濃度為橫軸（X 軸）。樣品的催乳素濃度，首先在Y軸上查找OD 值，橫向延伸至標準曲線，以標準曲線上的點拉垂直線與X軸相交，得出催乳素的濃度值。計算公式：4參數或Logit-Log。
特異性
Compound | % Cross reactivity |
hCG | 0 |
TSHl | 0 |
LH | 0 |
FSH | 0 |
hGH | 2.5 |
檢測限
測試20個陰性樣品的平均值加2倍標準差，0.35ng/ml (ppb)
