保留特性在液相色譜技術中可以反應分離物質理化性質，從色譜圖上能得到三個基本的參數：保留距離(時間、體積)、峰寬(單位是毫米，載氣的毫升數、時間)和峰高。雖然峰寬曾被用作鑑定的手段，但是根據保留特性進行鑑定，是最常用的方法。
基本介紹
- 中文名：保留特性
- 外文名：retention characteristic
- 領域：液相色譜技術等
- 色譜圖：保留距離、峰寬和峰高
- 目的：鑑定物質
- 保留特性：時間，體積等
陰離子交換色譜柱保留特性的變化規律,流動相等對蛋白質在金屬螯合柱保留特性影響,橫向電場體積排阻電色譜中蛋白質保留特性,
陰離子交換色譜柱保留特性的變化規律
選擇對二甲苯氧化體系的高效液相色譜分析為研究對象，詳細考察了陰離子交換色譜柱保留特性的變化，在整個色譜柱壽命期間(進樣超過1000次)，全程採集了保留時間、分離度等數據。在此基礎上，得出色譜柱保留特性的變化規律，並提出了相應的應對措施，把整個色譜柱壽命分成3個階段，分別採用不同條件的流動相。
實驗表明，隨著進樣次數的增加，色譜柱的保留特性持續發生變化，各組分的保留時間總的趨勢都在減小。TA作為二元酸對離子交換色譜柱的保留特性變化最敏感，其保留時間變化最大。隨著進樣次數的增加，色譜柱的穩定性增加。進樣約500次以後，各組分保留時間的變化明顯減緩。
在色譜柱工作的各個階段，組分間分離度的變化較為複雜，影響色譜分離的控制因素(關鍵組分對)也會發生變化。這主要是由於離子交換色譜體系中存在著多種電離平衡，它們共同影響著體系的色譜行為。
在離子交換色譜中，存在著3種電離平衡，分別是樣品組分的電離平衡、流動相中緩衝溶液的電離平衡、柱上離子交換基團的電離平衡。色譜柱保留行為的變化、流動相組成的調整，會綜合影響到上述的電離平衡，這種影響較為複雜，並不是一致的。如提高流動相的pH值，會促進流動相的電離，增加流動相的洗脫強度，減小樣品組分的保留；pH值的增加同時又會促進樣品的電離，增加樣品組分的保留，同時還會抑制色譜柱上矽烷銨鹽的電離，減小樣品組分的保留。樣品組分在柱上的保留時間，取決於上述3種電離平衡的綜合作用。所以組分的保留時間和組分之間分離度的變化，並不是單調的。
在對二甲苯氧化體系的分析中，4一CBA和4一HMBA的分離較為特殊。不同階段的色譜柱，對這兩種物質有不同的選擇性。新柱對4—HMBA保留較強，4—CBA先出峰；但是隨著進樣次數的增加，4一HMBA保留減弱的速度較4—CBA快，到色譜柱使用一定階段時，它的色譜峰會跑到4—CBA的前面。這使得在色譜柱使用的某一階段(一般在進樣200次左右)，這兩種物質很難分離。實驗表明，通過調整緩衝溶液的濃度和流動相的pH值仍無法實現該物質對的分離。
考慮到4—HMBA的分子中含有羥基，根據相似相溶原理，採用含有羥基的甲醇代替乙腈作為流動相中的有機溶劑，並輔以緩衝溶液的調整，成功地改變了保留的選擇性，4—CBA和4一HMBA達到了基線分離。採用的流動相條件：有機溶劑為甲醇10%(體積分數)，磷酸二氫銨濃度為0.20 moL/L，pH 4.3。
流動相等對蛋白質在金屬螯合柱保留特性影響
系統研究了流動相中鹽的性質和濃度、溶液、pH以及競爭配體對蛋白質在金屬螯合色譜中保留值的影響。導出了描述蛋白質在金屬螯合色譜中保留特徵的數學表達式，提出用洗脫強度指數ε表征鹽溶液的洗脫能力。根據不同色譜條件下蛋白質的保留特性，發現蛋白質在金屬螯合色譜中的保留是配位、靜電和疏水的協同作用。對與蛋白質強結合的金屬螯合柱，以配位作用為主，靜電作用為輔；對弱結合的金屬柱，以靜電作用為主，配位作用為輔。在流動相中加入高濃度非成絡鹽，可增強蛋白質和固定相間的疏水作用。利用金屬螯合配體和蛋白質間的作用力與色譜條件的相關性，對不同類型金屬螯合柱可選擇不同的洗脫方式。對弱結合的金屬螯合柱可用低濃度鹽或pH 梯度洗脫，對強結合的金屬螯合柱通常用競爭洗脫劑洗脫。實驗證明，NH3是一種優秀的競爭洗脫劑，它不僅效能高，而且價廉，固定金屬流失少，濃度易控制。改變色譜條件可改變金屬螯合配體和蛋白質間的作用力，提高金屬螯合色譜的選擇性。
