《保健食品中甘草酸的測定(GB/T 22248-2008)》由中華人民共和國衛生部提出並歸口。本標準負責起草單位：中國疾病預防控制中心營養與食品安全所。本標準參加起草單位：吉林省疾病預防控制中心、河北省疾病預防控制中心。本標準主要起草人：楊大進、肖晶、王竹天、李青、秦振順。本標準為首次發布。
基本介紹
- 中文名：保健食品中甘草酸的測定
- 外文名：Determination of glycyrrhizin in health food
- 類型：國家標準
- 發布日期：2008年
- 標準號：GB/T 22248-2008
- 提出部門：中華人民共和國衛生部
範圍,原理,試劑和材料,儀器和設備,分析步驟,計算結果,精密度,色譜圖,
範圍
本標準規定了保健食品中甘草酸的測定方法。
本標準適用於以甘草酸作為主要功效成分添加與保健食品中的甘草酸的測定。
當取樣量3.0g，定容至25ml，進樣量10µL時，方法的檢出限（LOD）為1.0×10-3g/kg；方法的定量限（LOQ）為3.0×10-4g/kg。線性範圍為5.0µg/mL~50µg/mL。
原理
根據甘草酸易溶於醇、水等極性溶劑的理化特性，不含油試樣中的甘草酸採用流動相進行提取，對於含油試樣則需要石油醚去油後再用流動相提取，過濾後進高相液相色譜儀，經反向C18色譜柱分離後，由紫外檢測器檢測，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。
試劑和材料
1、甲醇（CH3OH）：優級純
2、乙酸(CH3COOH)：分析純
3、石油醚（沸程60~90℃）：分析純
4、醋酸銨（CH3COONH4）：分析純
5、0.2mol 醋酸銨溶液：取醋酸銨15.42g，加水溶解成100ml。
6、水（H2O）：為實驗室一級用水，電導率（25℃）為0.01mS/m
7、甘草酸標準品：純度≥99﹪
8、甘草酸標準儲備液（1.00mg/ml）：準確稱量甘草酸銨標準品0.01g（精確至0.0001g）於10.0ml容量瓶中，加入流動相溶解並定容至刻度，混勻（標準儲備液放於2℃~10℃冰櫃中，有效期90d）
9、甘草酸標準使用液（100µg/mL）：準確吸取1.00mL甘草酸標準儲備液於10.0mL棕色容量瓶中，用流動相定容至刻度（此標準使用液在避光條件下於2℃~10℃冰櫃中，可保存90d）
儀器和設備
1、高效液相色譜儀：附紫外檢測器。
2、超音波清洗器
3、離心機：4000r/min
4、氮吹儀
分析步驟
1、試樣處理
（1）一般試樣：根據試樣中甘草酸是含量，稱取0.5g~3g均勻試樣（精確至0.001g），置於50mL棕色容量瓶中，加入流動相20mL，使溶液每毫升含甘草酸20µg/mL，超音波提取20min後，加流動相定容至刻度，搖勻，以3000r/min離心5min，過0.45µm濾膜，取濾液備用（如試樣中甘草酸含量較高，可適當將試樣稀釋後進樣）。 （2）含油試樣：根據試樣中甘草酸的含量，稱取稱取0.5g~3g均勻試樣（精確至0.001g），置於25mL離心管中，加入15mL石油醚振盪1min，以3000r/min離心5min，棄去石油醚，重複該程式三次，吹氮儀吹乾後，用流動相將所有內容物轉移至50mL容量瓶中，其餘步驟同（1）。
2、標準曲線的製備
臨用前將甘草酸銨標準使用液，用流動相配成5.00µg/mL 、10µg/mL 、20µg/mL 、40µg/mL 、50µg/mL的標準系列。
3、液相色譜參考條件
（1）色譜柱：ODS C18柱，250mm×4.6mm，5µm。
（2）柱溫：25℃
（3）紫外檢測器：檢測波長250nm。
（4）流動相：甲醇+0.2mol/L醋酸銨溶液+乙酸=67+33+1 。
（5）進樣體積：10µl 。
（6）流速：1.0mL/min。
（7）色譜分析：將標準溶液及試樣溶液注入色譜中，以保留時間定性，以試樣峰面積或峰高與標準比較定量。
計算結果
試樣中甘草酸的含量按式子（1）進行計算：
X=c×V×1000×F×0.98/m×1000×1000 (1)
式中：
X——試樣中甘草酸的含量，單位為克每千克（g/kg）；
C——從標準曲線查得的濃度，單位為微克每毫升（µg /mL）；
V——試樣定容體積，單位為毫升（mL）；
F——稀釋倍數；
0.98——甘草酸銨（分子質量：839.97）換折算為甘草酸（分子質量：822.93）的比值；
M——試樣的質量，單位為克(g)；
計算結果保留兩位有效數字。
精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
色譜圖
在上述條件下的色譜圖見圖1和圖2。
圖1
圖1
圖2