《伊瑪替尼治療胃腸道間質瘤耐藥相關microRNA的研究》是依託復旦大學，由石園擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：伊瑪替尼治療胃腸道間質瘤耐藥相關microRNA的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：石園
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
臨床觀察到小分子酪氨酸激酶抑制劑伊瑪替尼能有效控制約80%轉移/復發性惡性GIST，但2年左右約50%患者發生繼發耐藥。詳細機制需進一步研究。我們前期的工作通過Agilent晶片技術進行全基因組miRNA差異表達分析，已篩選出3個耐藥GIST與原發GIST顯著差異表達的miRNA分子標誌物。本研究擬通過螢光定量RT-PCR方法，對這些miRNA於50例耐藥和原發GIST中進行驗證。利用TargetScan等生物資料庫和降解組測序法，查找這些miRNA與GIST耐藥發生可能相關的靶基因，通過與轉染實驗相結合的Western Blot、酶譜法和螢光素酶活性檢測鑑定靶基因，從miRNA水平探討耐藥機制，促進對分子靶向治療耐藥機制的深入認識，為逆轉耐藥提供理論依據。
結題摘要
實驗背景：本課題組主要研究耐伊瑪替尼GIST和miRNA的關係以及耐伊瑪替尼GIST中miR-518a-5p 對PIK3C2A的作用。 實驗方法和結果：本課題組選擇了7對配對標本,即耐藥組和原發組標本均為同一患者的耐藥前後手術切除GIST標本，進行基因晶片篩選，篩選出耐藥組和原發組差異表達最顯著的miRNA其中上調的包括hsa-miR-1260b、hsa-miR-2964a-5p、hsa-miR-3907和hsa-miR-491-3p，下調的包括hsa-miR-518a-5p/hsa-miR-527、hsa-miR-4466、hsa-miR-595、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-3145-3p、hsa-miR-3655。通過real-time PCR對另外13對配對標本驗證，發現hsa-miR-518a-5p在耐藥組中明顯下調(P = 0.011)。然後我們從多個生物資料庫篩選到靶基因PIK3C2A，在耐伊瑪替尼GIST882R細胞中進行PIK3C2A的3’UTR luciferase ，驗證了miR-518a-5p和PIK3C2A的直接作用關係。隨後我們在882R細胞中建立了miR-518a-5p過表達及敲低細胞系，real-time PCR證實在882R miR-518a-5p過表達和敲低細胞系中，miR-518a-5p的表達分別實現了上調和下調，Western blot檢測證實miR-518a-5p過表達細胞系中PIK3C2A的表達下降較為明顯。最後我們利用CCK8法在過表達和敲低細胞系中檢測細胞IC50的變化，miR-518a-5p的過表達降低了細胞的IC50；敲低miR-518a-5p則增加細胞的IC50；採用TUNEL 法在過表達和敲低細胞系中檢測細胞凋亡的變化 ，miR-518a-5p的過表達增加了細胞的凋亡；敲低miR-518a-5p則降低細胞的凋亡。 實驗結論：有報導稱PIK3C2A促進腫瘤的存活，因此，miR-518a-5p在耐藥GIST中表達下降極可能通過上調PIK3C2A，影響細胞對藥物的反應，引起耐藥。 課題成果：本課題組已發表多篇論著，其中SCI收錄3篇，國核心心期刊收錄5篇。本課題組還發明了8項專利，均已授權，其中專利的高產組織晶片技術將用於本課題後續的實驗研究。本課題共培養研究生2名，其中畢業1名，在讀1名。
