人體主要內分泌激素對卵巢組織體外生長調節作用研究

《人體主要內分泌激素對卵巢組織體外生長調節作用研究》是依託中山大學，由李宇彬擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：人體主要內分泌激素對卵巢組織體外生長調節作用研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：李宇彬
• 依託單位：中山大學

中文摘要

輔助生育的發展亟待對卵泡整個漫長複雜的生長機理進行深入的研究，以給臨床提供重要的理論支持。卵泡生長涉及多方面因素影響，既往研究亦多進行短期培養，難以對卵泡的生長有深入的認識。本研究組近年已經對卵巢組織生長、分化進行了研究，建立了人類卵巢組織冷凍保存、異種移植（SCID小鼠）長期生長模型以及體外短期培養技術，為下一步卵巢組織生理實驗積累了豐富經驗。本研究目的是探索更長時限人類卵巢組織體外培養方法，以重點研究人體主要內分泌激素對人類卵巢中各級卵泡長期生長及分化的影響。研究分三部分包括：1、研究新鮮組織（參照態）中各組分重要因子表達情況；2、摸索人類卵巢組織長期培養技術的建立（培養態），並將參照態與培養態數據進行比較，選擇最合理的培養方法；3、使用此培養技術重點研究多種主要內分泌激素對人類卵巢組織生長的作用。期望所觀察到的人類卵泡生長發育現象能為今後深一步認識卵巢組織提供理論支持。

結題摘要

卵泡生長涉及多方面因素影響，目前對卵泡的生長的認識缺乏。本研究目的是探索更長時限人類卵巢組織體外培養方法，重點研究主要內分泌激素對人類卵巢中各級卵泡長期生長及分化的影響。研究分三部分：1、研究新鮮組織中各組分重要因子表達情況；2、摸索人類卵巢組織長期培養技術的建立；3、使用此培養技術研究主要內分泌激素對人類卵巢組織生長的作用。通過本課題實施獲得如下主要結果： （一）卵巢組織相關因子表達及凋亡研究方面顯示顆粒細胞是表達MMP-9最活躍細胞，在生長分化過程穩定持續表達。Ki-67增殖陽性信號在卵巢組織內呈稀疏散在分布，竇卵泡和次級卵泡中顆粒細胞相對較多表達。在凋亡研究方面，總Caspase-3檢測結果發現，組織中所有類型的卵泡都可有陽性表達。而Active Caspase-3組化和TUNEL原位雜交結果顯示人卵巢組織中只在竇卵泡顆粒細胞和間質有散在陽性細胞，其餘各級卵泡陰性。 我們進行了正常月經周期不孕女性血清睪酮水平的分析，發現血清睪丸激素與卵巢儲備評估指標有關，對IVF治療周期結局亦有影響。基礎性激素水平對卵子體外受精率無影響。同時發現敞開式授精受精失敗率比微滴法要低。我們分析PCOS患者顆粒細胞ADAMTS1的表達，發現其在PCOS中差異表達。結果提示在PCOS中下調的ADAMTS1與其低的獲卵率，卵子成熟率，受精率密切相關。 (二)建立Matrigel和低熔點瓊脂的卵巢組織體外培養系統。兩者均能夠支持人類卵巢較長時限的研究。在人類卵巢組織體外生長的12周期間，原始卵泡能迅速啟動生長，卵泡生長池率增加。但培養後顆粒細胞顯得明顯肥大，出現卵子與顆粒細胞生長不同步現象。而間質組織在培養後無明顯改變。 （三）我們分組觀察雄激素和高濃度胰島素對卵巢組織體外生長影響。結果顯示：同時添加睪酮和高濃度胰島素組總體卵泡存活率最高，對雌二醇、孕激素分泌及MMP-9分泌亦有促進作用，差別有統計學意義。通過將人類卵巢組織異種移植到SCID小鼠皮下在體探索性激素對卵巢組織生長影響。結果顯示宿主性別、去勢情況對原始卵泡存活率沒明顯影響。但局部無菌創口移植有較高原始卵泡存活率的趨勢明顯。 通過本項目實施，我們更深入了解了人類卵巢組織和內分泌激素之間的生理關係，建立了良好的長時限體外培養方法，並進行了部分內分泌激素和卵泡體外生長關係研究，為認識卵巢組織提供了良好的參考資料。