人源抗惡性瘧原蟲工程抗體的免疫保護作用研究

《人源抗惡性瘧原蟲工程抗體的免疫保護作用研究》是依託復旦大學，由付永鋒擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：人源抗惡性瘧原蟲工程抗體的免疫保護作用研究
• 依託單位：復旦大學
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：付永鋒

項目摘要

惡性瘧的防治是消除瘧疾的難點。抗體在惡性瘧的保護性免疫中起著至關重要的作用。本課題將已得到的高親和力並具有抑制作用的抗惡性瘧原蟲MSP119抗體的Fab片段進行全長化IgG3亞型抗體改造，構建IgG3亞型抗體的輕重鏈全長表達載體，通過篩選得到穩定高表達人源抗體的細胞株，製備出具有完整抗體功能活性的人源全長抗MSP119的IgG3亞型抗體。研究人源抗MSP119的IgG3亞型抗體阻斷與抑制裂殖子入侵紅細胞、隨裂殖子進入紅細胞後對紅細胞內的蟲體發育影響，以及抗體通過激活補體系統和抗體依賴細胞介導的細胞毒性作用以及抗體調理功能對惡性瘧原蟲裂殖子的殺傷作用，來闡明人源抗MSP119的IgG3亞型抗體在保護人體抵抗惡性瘧原蟲感染的保護作用機制，為下一步以猴子為動物模型的體內實驗提供理論和實驗基礎，推動我國原創性和具有自主知識的抗惡性瘧人源抗體藥物走向臨床，為惡性瘧的防治提供新的策略。

結題摘要

惡性瘧的防治是消除瘧疾的難點。抗體在惡性瘧的保護性免疫中起著至關重要的作用。本課題對已得到的高親和力並具有抑制作用的抗惡性瘧原蟲MSP119 抗體的Fab 片段進行全長化IgG1和IgG3 亞型抗體改造，構建IgG3 亞型抗體的輕重鏈全長表達載體，通過篩選得到穩定高表達人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG1的細胞株13株，穩定表達人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG3細胞株7株，經過大規模培養製備抗體，人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG1細胞株6w7C8產量可達到15mg/L；人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG3細胞株A4B4產量可達 18mg/L。經Biacore檢測，人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG1和IgG3與MSP119的高親和力較原始Fab片段提高30倍，其中人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG1的親和常數為2.33E+10M，解離常數為4.29E-11M，人源抗惡性瘧原蟲抗體IgG3的親和常數為2.82E+10M，解離常數為3.67E-11M。體外實驗，抗惡性瘧原蟲的人源抗體對惡性瘧原蟲裂殖子入侵的抑制作用隨抗體濃度的增加而提高，當抗體濃度為100 μg/ml時，抗惡性瘧原蟲IgG1的抑制作用最高，達到59.4%。當抗體濃度為200μg/ml時，抗惡性瘧原蟲IgG1的抑制作用最高，達到54.6%。抗惡性瘧原蟲MSP119的人源抗體IgG1的作用位點主要在33KD和19kD上，其抑制惡性瘧原蟲裂殖子入侵主要是通過阻斷MSP142的進一步加工合成MSP133和MSP119。本研究得到的抗惡性瘧原蟲抗體IgG1和IgG3不僅可以特異性識別惡性瘧原蟲裂殖子，還可以具有抑制惡性瘧原蟲入侵紅細胞作用，並闡明了其作用機理，為抗惡性瘧原蟲抗體藥物的研製奠定基礎。由於在惡性瘧原原蟲感染過程中，抗體的亞型轉化在抗瘧原蟲的免疫機制具有重要的作用。為此，本研究分別製備了具有相同抗原結合位點的不同亞型IgG1和IgG3抗體，為闡明抗體亞型轉化在瘧疾感染過程作用機制的研究奠定基礎。