《人巨細胞病毒UL128趨化因子功能鑑定及其致病機制研究》是依託浙江大學，由尚世強擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：人巨細胞病毒UL128趨化因子功能鑑定及其致病機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：尚世強
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
先天性耳聾是最常見的出生缺陷，HCMV是導致感染性先天性耳聾最主要的病原體，但其致聾機制尚不明確。研究表明GPCMVβ-趨化因子在病毒相關性耳聾發病中起重要作用。HCMV UL128具有β-趨化因子結構特徵，但尚無功能鑑定及在先天性耳聾中致病作用的報導。我們的預實驗顯示，轉染UL128表達載體的細胞培養上清對PBMC有明顯趨化作用。本項目擬在此基礎上，首先構建UL128重組蛋白的穩轉細胞表達體系；然後從結合趨化因子受體、激活信號轉導通路、體外趨化人PBMC及對PBMC凋亡和胞內鈣離子濃度的影響等方面鑑定UL128的趨化因子功能；進一步用UL128高表達和抑制表達的HCMV分別感染人內耳感覺上皮和PBMC共培養模型，研究兩者在致細胞炎症反應上的差異，揭示UL128在HCMV相關性耳聾發病機制中的作用。本項目將為深入探索HCMV相關性耳聾的發病機制提供新思路，為抗HCMV藥物研發提供新靶標。
結題摘要
本項目如期、圓滿完成所有研究計畫，取得下列研究成果：(1) 成功構建UL128重組蛋白（rUL128）真核表達系統，純化獲得分子量約為26KD的rUL128，濃縮得到濃度為0.1mg/ml的目的蛋白，實現HCMV UL128基因體外高效、穩定的表達；(2) 體外趨化試驗證實rUL128（100ng/ml）具有與人β-趨化因子相似的趨化PBMC的作用，且無明顯濃度依賴性，免疫組化結果顯示rUL128具有結合PBMC胞膜受體的功能，濃度為50ng/ml和100ng/ml的rUL128均可使PBMC胞內Ca2+濃度呈現短暫升高，rUL128蛋白具有活化PBMC的功能；(3) 成功分離獲得耳蝸感覺上皮細胞及原始祖細胞，成功構建HCMV感染耳蝸上皮細胞模型；(4) HCMV野生病毒株感染組織細胞與PBMC共培養體系，致共培養上清炎症因子IL-6、TNF-α釋放明顯增加，且IL-6的表達具有時間累積效應，RNA干擾獲得的UL128缺陷病毒株致PBMC炎症因子釋放能力明顯削弱。本項目已發表SCI收錄論文3篇和中文綜述1篇，參加全國性學術會議並在會上作口頭報告2次，培養博士研究生1名。
