乙型腦炎病毒NS1蛋白與宿主蛋白互作的分子機制

《乙型腦炎病毒NS1蛋白與宿主蛋白互作的分子機制》是依託華南農業大學，由亓文寶擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：乙型腦炎病毒NS1蛋白與宿主蛋白互作的分子機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：亓文寶
• 依託單位：華南農業大學

項目摘要

乙型腦炎是一種重要的人獸共患傳染病。NS1蛋白在病毒的複製、免疫保護、神經侵染性和致病性方面都有重要作用。迄今為止，NS1蛋白的大部分作用機制還不清楚。本研究擬通過一種新型高效的研究蛋白互作的方法，利用Strep標籤標記的JEV複製子及JEV感染性cDNA克隆，通過Pull Down技術和LC-MS/MS分析，鑑定與NS1蛋白互作的宿主蛋白，建立相關的蛋白互作網路；進一步通過針對相關蛋白的RNAi和過表達方式，系統研究相關蛋白在JEV生命周期中的作用；利用丙氨酸掃描誘變技術確定NS1蛋白的互作功能區域，通過對相關功能區域的修飾，在體內和體外評估其功能。揭示乙型腦炎病毒NS1蛋白與宿主蛋白的互作網路和分子機制，為該乙型腦炎的基礎研究和綜合防控提供科學數據和技術支持。

結題摘要

乙型腦炎是一種重要的人獸共患傳染病。NS1 蛋白在病毒的複製、免疫保護、神經侵染性和致病性方面都有重要作用。迄今為止，NS1 蛋白的大部分作用機制還不清楚。本研究擬通過一種新型高效的研究蛋白互作的方法，利用Strep 標籤標記的NS1蛋白，通過Pulldown技術和LC-MS/MS分析，篩選出與日本乙型腦炎病毒NS1蛋白互作的28個候選宿主蛋白，建立了NS1-宿主蛋白互作網路。選取HSPA6蛋白、FARSA蛋白和HAX1蛋白，套用雙分子螢光互補技術（BiFC）和免疫共沉澱（CO-IP）驗證候選HSPA6蛋白、FARSA蛋白、HAX1蛋白分別與NS1蛋白的互作關係。初步探索了相關蛋白在JEV 生命周期中的作用。進一步通過RNAi技術和過表達方式，探討HSPA6在JEV生命周期中的作用。建立了日本乙型腦炎病毒反向遺傳系統，為後續功能研究中評估不同位點突變作用奠定了基礎。為該乙型腦炎的基礎研究和綜合防控提供科學數據和技術支持。