中和試驗

基本介紹

• 名稱：中和試驗
• 所屬分類：免疫學

正常值

人體處於動態平衡、健康狀態。

臨床意義

本試驗主要用於：①從待檢血清中檢出抗體，或從病料中檢出病毒，從而診斷病毒性傳染病;②用抗毒素血清檢查材料中的毒素或鑑定細菌的毒素類型;③測定抗病毒血清或抗毒素效價;④新分離病毒的鑑定和分型，中和試驗不僅可在易感的實驗動物體內進行，亦可在細胞培養上或雞胚上進行。試驗方法主要有簡單定性試驗、固定血清稀釋病毒法、固定病毒稀釋血清法、空斑減少法等。

注意事項

不合宜人群： 沒有。
　　檢查前禁忌：注意正常的生活飲食習慣，注意個人衛生。
　　檢查時要求：積極配合醫生。

檢查過程

(一)簡單定性中和試驗
　　本法主要用於檢出病料中的病毒，亦可進行初步鑑定或定型。先根據病毒易感性選定試驗動物(或雞胚、細胞培養)及接種途徑。將病料研磨，並稀釋成一定濃度(約100 LD50-1 000LD50或TCID50)。污染的病料需加抗生素(青黴素、鏈黴素各200-1 000單位)，或用細菌濾器過濾，與已知的抗血清(適當稀釋或不稀釋)等量混合，並用正常血清加稀釋病料作對照。混合後置37℃1h，分別接種實驗動物，每組至少3隻。分別隔離飼喂，觀察發病和死亡情況。對照動物死亡，而中和組動物不死，即證實該病料中含有與該抗血清相應的病毒。本法亦可用於毒素(如毒毒素)的鑑定和分型。
　　(二)固定血清稀釋病毒法
　　本法多將病毒作10倍遞增稀釋，分置2列試管，第一列加正常血清(對照組)，第二列加待檢血清(試驗組)。混合後，置37℃作用1h，將各管混合液分別接種選定的試驗動物，每一稀釋度用3-5隻動物。接種後，逐日觀察，並記錄其死亡數，觀察結束後，計算LD50和中和指數(表7-1、表7-2)，本法適用於大量檢樣的檢測。
　　本法多用以檢出待檢血清中的中和抗體，對病毒而言，通常中和指數大於50者判為陽性，10-49為可疑，小於10為陰性。
　　(三)固定病毒稀釋血清法
　　本法用以測定抗病毒血清的中和價，將待檢血清2倍遞增稀釋，加等量已知毒價的病毒液(與血清混合後，每一接種劑量含病毒100LD50)，搖勻後，置37℃作用1h，接種實驗動物。
　　註：[1] 接種劑量0.1ml，含病毒100LD50;
　　[2] 系指與病毒混合後的稀釋度;
　　[3] 分母為接種數，分子為保護數;
　　[4] PD50為半數保護，其計算法同LD50的計算。
　　(四)空斑減少法
　　在細胞培養上進行病毒中和試驗，近年來多採用空斑減少法。先將病毒稀釋成適當濃度，使每0.2ml含80個-100個PFU(空斑形成單位)，與不同稀釋度的待檢血清等量混合，置37℃作用1h-2h，分別測定PFU，使空斑減少50%血清稀釋度即為該血清的中和價。見表7-4。
　　表7-4 空斑減少法中和試驗示例
　　註：[1] 血清用4倍遞增稀釋;
　　[2] 空斑減少50%的血清稀釋度，其計算法同LD50的計算。

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