一種從豬肺中提取肝素的生產方法:專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,

《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》是安徽科寶生物工程有限公司於2015年1月26日申請的發明專利，該專利申請號為2015100362187，公布號為CN104530262A，專利公布日為2015年4月22日，發明人是郭慶、徐賓朋、趙厚發，該發明涉及生物醫藥領域。

《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》步驟如下：將新鮮豬肺絞碎成漿液、漿液保溫酶解、酶解液過濾收集濾液、對濾液進行除蛋白處理、超濾、氧化沉澱、冷凍乾燥得肝素粗品。該發明的優點和有益效果為：1、該發明採用的酶解方法能更徹底全面地溶解豬肺漿液，用胰蛋白酶終止酶解，真空冷凍乾燥技術穩定了產品的質量以及提高收率，同時獲得的粗品雜質少、效價高；2、該發明生產方法中採用澄清劑來替代乙醇反覆醇沉來去除蛋白質的傳統工藝，具有去除率高，節約了大量乙醇的使用量，降低了生產成本；3、該發明工藝設計合理，生產無毒、無害、生物綠色環保，豬肺原料來源易得，運營生產成本低，適合大規模工業化生產。

2017年6月22日，《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》獲得安徽省第五屆專利獎優秀獎。

基本介紹

中文名：一種從豬肺中提取肝素的生產方法
公布號：CN104530262A
公布日：2015年4月22日
申請號：2015100362187
申請日：2015年1月26日
申請人：安徽科寶生物工程有限公司
地址：安徽省淮北市烈山區劉莊工業園008號
發明人：郭慶、徐賓朋、趙厚發
Int.Cl.：C08B37/10(2006.01)I
類別：發明專利

專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,權利要求,實施方式,榮譽表彰,

專利背景

肝素，是酸性粘多糖硫酸酯類抗凝血藥。2015年1月之前的研究證明肝素還有降血脂作用，國際市場對肝素的需求一直十分旺盛。因肝素是從動物內臟中提取加工而得的，產量受到一定限制，時常滿足不了市場需求。自20世紀90年代後期開始，全球市場肝素需求大幅增加，中國肝素生產和出口連年均以較大幅度上升，出口量和出口金額呈快速增長態勢。中國已成為世界上首屈一指的肝素原料藥出口大國。2001年，中國肝素產品出口金額為4460萬美元。2002年，出口金額達5894萬美元，比上年增長了32.17％。肝素產品在中國醫藥類產品出口金額排序中已躋身前5位，僅次於維生素C、檸檬酸、維生素E和磺胺。

中國生產的肝素產品除滿足中國市場外，還大量出口。長期以來，中國產品出口順暢，只要質量達到要求，常常有多少就出口多少。與之形成對比的是，由於中國的經濟發展狀況和人民生活水平的限制，對這種昂貴（注射用精品8～10美元/百萬，口服用為7～8美元/百萬）的抗凝血藥中國消費量極小，主要是創匯，銷往日本、美國、歐洲等已開發國家和地區。

截至2015年1月，中國生產肝素的方法，主要是鹽解法和酸解法，比如公開號為CN101735340A、CN101649008A、CN101519459A等等的中國發明申請，這兩種方法都是採用豬小腸黏膜為原料，在鹼性條件下通過鹽解、酶解，除去部分蛋白質後，通過三甲胺季銨性強鹼性陽離子交換樹脂吸附劑洗脫，在洗脫液中加以乙醇沉澱既得肝素鈉初級原料出售，其缺點是生產周期長達48小時，反應溫度為95-100℃，能源消耗大，水解不完全，收率低，生產1億國際單位（IU）肝素粗品需2800-3000根豬小腸黏膜，所得產品純度低，粗品含肝素至多為80效價/毫克；並產生大量的肥腸渣和廢水，污染環境；且生產過程中樹脂再生困難，這種製備方法由於生產周期長，水解不完全、不徹底，製得的肝素鈉純度低、收率低、效價低，很難進行規模性生產，且不能滿足市場的大量需求。

發明內容

專利目的

《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》的目的在於克服2015年1月之前技術的不足之處，提供一種產品生產周期短、純度高、效價高、雜質少、綠色環保的利用豬肺提取肝素粗品的生產方法，本工藝採用生物酶解法從原材料易得的豬肺中提取肝素粗品。

技術方案

《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》其特徵在於：步驟如下：（1）預處理：將豬肺清洗，去除內外污物和脂肪後，絞碎成糜狀，並在充分攪拌下，加入水攪拌得到豬肺混合液，其中豬肺和水的質量比為1：3-4；（2）酶解：調豬肺混合液pH值為6.5～8.0，加入豬肺重量的1.5％～2.5％的硫酸軟骨素複合酶，攪拌均勻，升溫至30～45℃，保溫反應30～60分鐘後，保持反應液的pH值為7.0～7.5，加入豬肺重量的0.25％～0.5％胰蛋白酶，攪拌均勻，保溫2～4小時，繼續升溫到90～100℃，保持5～10分鐘，冷卻，得到豬肺酶解液；（3）除蛋白：過濾豬肺酶解液，去除表面油脂層，調濾液pH值為8.5～10.5，攪拌升溫到55～65℃時加入豬肺重量的0.1％～0.4％的澄清劑，繼續升溫至90～95℃，保溫反應2～4小時，冷卻至常溫；（4）超濾：將上述液體用0.2～0.4微米濾膜進行過濾，得過濾液；（5）氧化沉澱：加入雙氧水，使過濾液中雙氧水的含量為10～30克/千克，常溫反應8～12小時過濾，得濾液，將濾液調pH至4.5～5.5，加入等體積的無水乙醇沉澱過夜後，除去上層清液，沉澱物為粗品肝素；（6）冷凍乾燥：將粗品肝素放入真空冷凍乾燥箱內，設定溫度-20～10℃，真空度0.05～0.08兆帕，乾燥時間2～4小時。所述的一種從豬肺中提取肝素的生產方法，其特徵在於：所述步驟（2）硫酸軟骨素複合酶為硫酸軟骨素酶A、B和C中二種或以上的組合。

所述的一種從豬肺中提取肝素的生產方法，其特徵在於：所述步驟（3）澄清劑為天然1+1澄清劑，使用之前用冰醋酸配成1％的溶液。

所述的一種從豬肺中提取肝素的生產方法，其特徵在於：所述步驟（5）調pH值所用的酸為冰醋酸、草酸、檸檬酸中的一種或者二種混合。

改善效果

《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》採用的酶解方法能更徹底全面地溶解豬肺漿液，用胰蛋白酶終止酶解，真空冷凍乾燥技術穩定了產品的質量以及提高收率，同時獲得的粗品雜質少、效價高；
該發明生產方法中採用澄清劑來替代乙醇反覆醇沉來去除蛋白質的傳統工藝，具有去除率高，節約了大量乙醇的使用量，降低了生產成本；
該發明工藝設計合理，生產無毒、無害、生物綠色環保，豬肺原料來源易得，運營生產成本低，適合大規模工業化生產。

權利要求

1.《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》其特徵在於：步驟如下：（1）預處理：將豬肺清洗，去除內外污物和脂肪後，絞碎成糜狀，並在充分攪拌下，加入水攪拌得到豬肺混合液，其中豬肺和水的質量比為1：3-4；（2）酶解：調豬肺混合液pH值為6.5～8.0，加入豬肺重量的1.5％～2.5％的硫酸軟骨素複合酶，攪拌均勻，升溫至30～45℃，保溫反應30～60分鐘後，保持反應液的pH值為7.0～7.5，加入豬肺重量的0.25％～0.5％胰蛋白酶，攪拌均勻，保溫2～4小時，繼續升溫到90～100℃，保持5～10分鐘，冷卻，得到豬肺酶解液；（3）除蛋白：過濾豬肺酶解液，去除表面油脂層，調濾液pH值為8.5～10.5，攪拌升溫到55～65℃時加入豬肺重量的0.1％～0.4％的澄清劑，繼續升溫至90～95℃，保溫反應2～4小時，冷卻至常溫；（4）超濾：將上述液體用0.2～0.4微米濾膜進行過濾，得過濾液；（5）氧化沉澱：加入雙氧水，使過濾液中雙氧水的含量為10～30克/千克，常溫反應8～12小時過濾，得濾液，將濾液調pH至4.5～5.5，加入等體積的無水乙醇沉澱過夜後，除去上層清液，沉澱物為粗品肝素；（6）冷凍乾燥：將粗品肝素放入真空冷凍乾燥箱內，設定溫度-20～10℃，真空度0.05～0.08兆帕，乾燥時間2～4小時。

2.根據權利要求1所述的一種從豬肺中提取肝素的生產方法，其特徵在於：所述步驟（2）硫酸軟骨素複合酶為硫酸軟骨素酶A、B和C中二種或以上的組合。

3.根據權利要求1所述的一種從豬肺中提取肝素的生產方法，其特徵在於：所述步驟（3）澄清劑為天然1+1澄清劑，使用之前用冰醋酸配成1％的溶液。

4.根據權利要求1所述的一種從豬肺中提取肝素的生產方法，其特徵在於：所述步驟（5）調pH值所用的酸為冰醋酸、草酸、檸檬酸中的一種或者二種混合。

實施方式

實施例1

《一種從豬肺中提取肝素的生產方法》其特徵在於：步驟如下：（1）預處理：將豬肺5千克清洗，去除內外污物和脂肪後，絞碎成糜狀，並在充分攪拌下，加入15千克水攪拌得到豬肺混合液；（2）酶解：用氫氧化鈉調豬肺混合液pH值為6.5，加入75克的硫酸軟骨素酶A和C，攪拌均勻，升溫至30℃，保溫反應30分鐘後，保持反應液的pH值為7.0，加入12.5克胰蛋白酶，攪拌均勻，保溫2小時，繼續升溫到90℃，保持5分鐘，冷卻，得到豬肺酶解液；（3）除蛋白：過濾豬肺酶解液，去除表面油脂層，用氫氧化鈉調濾液pH值為8.5，攪拌升溫到55℃時加入5克的澄清劑，繼續升溫至90℃，保溫反應2小時，冷卻至常溫；（4）超濾：將上述液體用0.2微米濾膜進行過濾，得過濾液；（5）氧化沉澱：加入雙氧水，使過濾液中雙氧水的含量為10/千克，常溫反應8小時過濾，得濾液，將濾液用冰醋酸調pH至4.5，加入20千克的無水乙醇沉澱過夜後，除去上層清液，沉澱物為粗品肝素；（6）冷凍乾燥：將粗品肝素放入真空冷凍乾燥箱內，設定溫度-20℃，真空度0.05兆帕，乾燥時間2小時，即得肝素粗品20克，其效價為每毫克100單位。

實施例2

該發明其特徵在於：步驟如下：（1）預處理：將100千克豬肺清洗，去除內外污物和脂肪後，絞碎成糜狀，並在充分攪拌下，加入350千克水攪拌得到豬肺混合液（2）酶解：用氫氧化鈉調豬肺混合液pH值為7.0，加入豬肺重量的2千克的硫酸軟骨素酶A和B，攪拌均勻，升溫至40℃，保溫反應45分鐘後，保持反應液的pH值為7.0，加入0.3千克胰蛋白酶，攪拌均勻，保溫3小時，繼續升溫到95℃，保持7分鐘，冷卻，得到豬肺酶解液；（3）除蛋白：過濾豬肺酶解液，去除表面油脂層，用氫氧化鈉調濾液pH值為9.0，攪拌升溫到60℃時加入0.2千克的澄清劑，繼續升溫至93℃，保溫反應3小時，冷卻至常溫；（4）超濾：將上述液體用0.2微米濾膜進行過濾，得過濾液；（5）氧化沉澱：加入雙氧水，使過濾液中雙氧水的含量為20克/千克，常溫反應10小時過濾，得濾液，將濾液用草酸調pH至5.0，加入350千克無水乙醇沉澱過夜後，除去上層清液，沉澱物為粗品肝素；（6）冷凍乾燥：將粗品肝素放入真空冷凍乾燥箱內，設定溫度-10℃，真空度0.07兆帕，乾燥時間3小時，即得肝素粗品0.5千克，其效價為每毫克90單位。

實施例3

該發明其特徵在於：步驟如下：（1）預處理：將1000千克豬肺清洗，去除內外污物和脂肪後，絞碎成糜狀，並在充分攪拌下，加入4000千克水攪拌得到豬肺混合液（2）酶解：調豬肺混合液pH值為8.0，加入豬肺重量的25千克的硫酸軟骨素酶B和C，攪拌均勻，升溫至45℃，保溫反應60分鐘後，保持反應液的pH值為7.5，加入5千克胰蛋白酶，攪拌均勻，保溫4小時，繼續升溫到100℃，保持10分鐘，冷卻，得到豬肺酶解液；（3）除蛋白：過濾豬肺酶解液，去除表面油脂層，用氫氧化鈉調濾液pH值為10.5，攪拌升溫到65℃時加入4千克的澄清劑，繼續升溫至95℃，保溫反應4小時，冷卻至常溫；（4）超濾：將上述液體用0.4微米濾膜進行過濾，得過濾液；（5）氧化沉澱：加入雙氧水，使過濾液中雙氧水的含量為30克/千克，常溫反應12小時過濾，得濾液，將濾液用檸檬酸調pH至5.5，加入4000千克的無水乙醇沉澱過夜後，除去上層清液，沉澱物為粗品肝素；（6）冷凍乾燥：將粗品肝素放入真空冷凍乾燥箱內，設定溫度0℃，真空度0.08兆帕，乾燥時間4小時，即得肝素粗品4.8千克，其效價為每毫克100單位。

榮譽表彰