《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》是中國農業科學院飼料研究所於2008年5月28日申請的發明專利，該專利申請號為2008101133433，公布號為CN101457207，專利公布日為2009年6月17日，發明人是姚斌、羅會穎、王亞茹、楊培龍、柏映國、石鵬君、孟昆、袁鐵錚、史秀雲。
《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》其β－甘露聚糖酶的具有以下性質：最適pH1.0～1.5，最適溫度65℃，良好的pH穩定性和熱穩定性、高比活；極好的蛋白酶抗性以及易於工業化發酵生產。作為一種新型的酶製劑，可廣泛用於動物飼料、食品、醫藥、釀酒、能源工業等。
2017年12月，《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》獲得第十九屆中國專利優秀獎。
基本介紹
- 中文名：一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用
- 公布號：CN101457207
- 公布日： 2009年6月17日
- 申請號：2008101133433
- 申請日： 2008年5月28日
- 申請人：中國農業科學院飼料研究所
- 地址：北京市海淀區中關村南大街12號
- 發明人： 姚斌、羅會穎、王亞茹、楊培龍、柏映國、石鵬君、孟昆、袁鐵錚、史秀雲
- 專利代理機構： 北京法思騰智慧財產權代理有限公司
- 代理人：楊小蓉
- 類別：發明專利
專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,附圖說明,技術領域,權利要求,實施方式,操作內容,實施案例,榮譽表彰,
專利背景
β-甘露聚糖酶（β-mannanase endo-1，4-β-D-mannanmannohydr-oaseEC3.2.1.78）是一類能水解甘露聚糖的半纖維素酶，存在於微生物，動植物中。植物半纖維素的數量僅次於纖維素，甘露聚糖是植物半纖維素的主要成份，是以1，4-β-D-吡喃甘露糖苷鍵連線而成的線性多糖。在β-甘露聚糖外切酶和甘露糖苷內切酶的作用下，甘露聚糖可被分解為甘露糖。
在許多微生物，植物（瓜兒豆等豆類植物的種子，西紅柿的種子和果實）和一些低等動物（藍貽貝Mytilus deulis，海洋軟體動物Littorina brevicula）中都存在β-甘露聚糖酶（Millward-Sadler，et al Microbiol.Lett.141，183-188）。微生物則是產β-甘露聚糖酶的重要來源，已報導的有芽孢桿菌、假單胞菌、弧菌等。真菌中有麴黴、鏈黴菌、里氏木酶等。微生物來源的β-甘露聚糖酶具有活力高、成本低、來源穩定、提取方便等明顯優點，已在實際生產和基礎研究中得到套用（McCleary，B.V.Carbohydr.Res.119，191-219.）。
截止到2008年，隨著甘露寡糖生理功能的發現，綠色飼料的興起以及人們環保意識的增強，對β-甘露聚糖酶的研究和利用已進入了一個新的階段。β-甘露聚糖酶已被廣泛套用於食品、醫藥、飼料、造紙、紡織印染、石油開採、精細化工及生物技術等諸多領域，是一種新型的工業酶，具有很大的潛在套用價值。截止到2008年5月，中國國內外對β-甘露聚糖酶的研究和開發集中在細菌產生的鹼性和中性酶方面。對於酸性甘露聚糖酶的報導較少。而在飼料中套用的甘露聚糖酶，需要在酸性條件下具有高活性。酸性β-甘露聚糖酶主要來源於真菌，如：麴黴屬和木霉屬的菌。它們作用的最適pH值在2.4～5.0。但天然菌株所產的甘露聚糖酶產量低，不能滿足工業化生產的需要。隨著分子生物學的發展，部分酸性甘露聚糖酶的基因已經克隆並在不同的宿主中進行了表達。但仍沒有工業化生產嗜酸甘露聚糖酶。在中國，對嗜酸甘露聚糖酶的研究很少，僅克隆了少數酸性甘露聚糖酶基因，運用基因工程手段來產業化生產嗜酸甘露聚糖酶產品還未見報導。
該研究得到了一個新的甘露聚糖酶基因，其編碼的甘露聚糖酶具有強嗜酸性，作用pH範圍廣，較好的耐熱性和抗蛋白酶能力，可作套用於飼料、食品、醫藥等工業。
發明內容
專利目的
《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》的目的在於提供一種產嗜酸β-甘露聚糖酶的菌株Bisporasp.MEY-1。該發明再一目的是提供來源於上述菌株的嗜酸β-甘露聚糖酶。該發明的再一目的是提供上述β-甘露聚糖酶的基因。該發明的再一目的是提供包含上述β-甘露聚糖酶的重組載體。該發明的再一目的是提供包含上述β-甘露聚糖酶基因的重組菌株。該發明的再一目的是提供一種製備嗜酸β-甘露聚糖酶的方法。該發明的再一目的是提供上述嗜酸β-甘露聚糖酶的套用。
技術方案
《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》首先所要解決的技術問題是克服2008年5月之前的技術的不足，提供一種性質優良的、適合於在飼料、食品、釀酒以及能源工業中套用新的β-甘露聚糖酶。該發明人篩選到一種天然菌株，它所產生的β-甘露聚糖酶適合於在飼料、食品、釀酒以及能源工業中使用。該嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1，於2008年5月19日保存於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，100101），其保藏號為：CGMCCNo.2500。
從上述菌株中獲得了一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A，其胺基酸序列如SEQIDNO.1：
其中，該酶全長448個胺基酸，N端20個胺基酸為其預測的信號肽序列“MLFQVGTVLLLAWLSPTTDA”。因此，成熟的嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A的理論分子量為46.8kDa，其胺基酸序列如SEQIDNO.2：
該β-甘露聚糖酶MAN5A同時具有好的熱穩定性而在常溫下又必須具備高活性、在酸性和中性的範圍內均具有高活性、抗蛋白酶降解等特性。該發明篩選到的嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1所產生的β-甘露聚糖酶，其最適pH值為1.0～1.5，在pH1.0～5.0的範圍內維持70％以上的酶活性；最適溫度為65℃，在70℃下處理20分鐘，剩餘酶活性為50％，在80℃下處理2分鐘，剩餘酶活性為46％；具有抗胃蛋白酶和胰蛋白酶處理能力。這種性質的β-甘露聚糖酶還未曾有過報導。
該發明還提供了編碼上述嗜酸β-甘露聚糖酶的基因。
該酶的全基因序列如SEQIDNO.3所示：
該發明通過PCR的方法分離克隆了這一β-甘露聚糖酶基因man5A，DNA全序列分析結果表明，β-甘露聚糖酶MAN5A結構基因man5A全長1517bp，含有3個內含子，+792～+849bp，+1021～1075bp，+1120～1176bp為其內含子序列，cDNA長1347bp，其cDNA序列如SEQID NO.4所示。
其中，信號肽的鹼基序列為：ATGCTTTTTCAAGTGGGAACAGTGCTTTTATTGGCCTGGCTGTCTCCCACGACAGACGCG。
成熟蛋白理論分子量為46.8kDa，該酶屬於糖基水解酶第5家族。將β-甘露聚糖酶基因man5AcDNA序列及推導出的胺基酸序列在GenBank中進行BLAST比對發現，該基因與來源於Emericellanidulans的甘露聚糖酶序列一致性最高，核苷酸序列一致性為45.4％，胺基酸序列一致性為47.1％。說明MAN5A是一種新的甘露聚糖酶。並為此基因的改造和在各種外源基因表達系統中高效表達提供優良的基因材料。
該發明還提供了包含上述β-甘露聚糖酶基因的重組載體，優選為pPIC9-man5A。將該發明的β-甘露聚糖酶基因插入到表達載體合適的限制性酶切位點之間，使其核苷酸序列可操作的與表達調控序列相連線。作為該發明的一個最優選的實施方案，優選為將β-甘露聚糖酶基因插入到質粒pPIC9上的SnaBI和NotI限制性酶切位點之間，使該核苷
酸序列位於AOX1啟動子的下游並受其調控，得到重組酵母表達質粒pPIC9-man5A。
該發明還提供了包含上述β-甘露聚糖酶基因的重組菌株，優選為重組菌株GS115/man5A。
該發明還提供了一種製備嗜酸β-甘露聚糖酶的方法，包括以下步驟：
1）用上述重組載體轉化宿主細胞，得重組菌株；
2）培養重組菌株，誘導重組β-甘露聚糖酶的表達；
3）回收並純化所表達的β-甘露聚糖酶。
其中，優選所述宿主細胞為畢赤酵母細胞、啤酒酵母細胞或多型漢遜酵母（HansenulaPolymorphaYeast）細胞，優選將重組酵母表達質粒轉化畢赤酵母細胞（Pichicpastoris）GS115，得到重組菌株GS115/man5A。
該發明還提供了上述嗜酸β-甘露聚糖酶的套用。
運用基因工程手段來產業化生產嗜酸甘露聚糖酶產品還未見報導。
該發明提供了一個新的甘露聚糖酶基因，其編碼的甘露聚糖酶具有強嗜酸性，作用pH範圍廣，較好的耐熱性和抗蛋白酶能力，可作套用於飼料、食品、醫藥等工業。根據該發明的技術方案就可以實現利用基因工程手段生產嗜酸甘露聚糖酶。
改善效果
《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》得到的嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1，於2008年5月19日保存於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，100101），其保藏號為：CGMCCNo.2500。
附圖說明
圖1man5A在畢赤酵母中表達的β-甘露聚糖酶的SDS-PAGE分析，1，分子量標準；2，發酵培養上清；3，純化的重組β-甘露聚糖酶。
圖2該發明重組β-甘露聚糖酶的最適pH值。
圖3該發明β-甘露聚糖酶的pH穩定性。
圖4該發明β-甘露聚糖酶最適反應溫度。
圖5該發明β-甘露聚糖酶熱穩定性。
圖6蛋白酶處理該發明β-甘露聚糖酶後的酶活曲線。
圖7蛋白酶處理該發明β-甘露聚糖酶後的SDS-PAGE分析，1，分子量標準；2，β-甘露聚糖酶MAN5A；3，胰蛋白酶處理後的MAN5A；4、5，胃蛋白酶處理後的MAN5A；6，胰蛋白酶；7，胃蛋白酶。
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技術領域
《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》涉及基因工程領域，具體地，該發明涉及一種產嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A的菌株Bisporasp.MEY-1，和從該菌種中得到的嗜酸β-甘露聚糖酶及其基因man5A、包含該基因的重組載體和套用。
權利要求
1.一種嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1，其保藏號為：CGMCCNo.2500。
2.一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A，其特徵在於，其胺基酸序列如SEQIDNO.1所示。
3.一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A，其特徵在於，其胺基酸序列如SEQIDNO.2所示。
4.一種嗜酸β-甘露聚糖酶基因man5A，其特徵在於，編碼權利要求2或3所述的β-甘露聚糖酶。
5.如權利要求4所述的β-甘露聚糖酶基因man5A，其特徵在於，其鹼基序列如SEQIDNO.3所示。
6.如權利要求4所述的β-甘露聚糖酶基因man5A，其特徵在於，其鹼基序列如SEQIDNO.4所示。
7.包含權利要求4所述β-甘露聚糖酶基因的重組載體。
8.根據權利要求7所述的重組載體，其特徵在於，所述重組載體為pPIC9-man5A，其中，通過將權利要求4所述的β-甘露聚糖酶基因man5A連線到表達載體pPIC9上的酶切位點SnaBI和NotI之間，獲得所述重組載體pPIC9-man5A。
9.包含權利要求4所述β-甘露聚糖酶基因的重組菌株。
10.一種製備嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A的方法，其特徵在於，包括以下步驟：
1）用權利要求7所述重組載體轉化宿主細胞，得重組菌株；
2）培養重組菌株，誘導重組β-甘露聚糖酶的表達；
3）回收並純化所表達的β-甘露聚糖酶MAN5A。
11.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述宿主細胞為畢赤酵母細胞、啤酒酵母細胞或多型漢遜酵母細胞。
12.權利要求2或3所述的嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A在飼料、食品、醫藥添加劑中的套用。
實施方式
操作內容
1、菌株及載體：Bisporasp.MEY-1由《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》人分離獲得，畢赤酵母表達載體pPIC9及菌株GS115購自於Invitrogen公司。
2、酶類及其它生化試劑：內切酶購自TaKaRa公司，連線酶購自Invitrogen公司。燕麥木聚糖購自Sigma公司，其它都為國產試劑（均可從普通生化試劑公司購買得到）。
3、培養基：
（1）Bisporasp.MEY-1培養基為馬鈴薯汁培養基：1000毫升馬鈴薯汁，10克葡萄糖，25克瓊脂，pH2.5。
（2）大腸桿菌培養基LB（1％蛋白腖、0.5％酵母提取物、1％NaCl，pH7.0）。
（3）BMGY培養基：1％酵母提取物，2％蛋白腖，1.34％YNB，0.00004％Biotin，1％甘油（V/V）。
（4）BMMY培養基：除以0.5％甲醇代替甘油，其餘成份均與BMGY相同，pH4.0。
說明：以下實施例中未作具體說明的分子生物學實驗方法，均參照《分子克隆實驗指南》（第三版）J.薩姆布魯克一書中所列的具體方法進行，或者按照試劑盒和產品說明書進行。
實施案例
- 實施例1
篩選嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1
將來源於江西某礦的鈾礦廢水樣品經富集培養後（富集培養基：（NH4）2SO45的克/升，KH2PO41的克/升，MgSO4·7H2O0.5的克/升，FeSO4·7H2O0.01的克/升，CaCl20.2的克/升，魔芋粉0.5％，pH2.5），按常規稀釋後塗布於產酶培養基（同富集培養基，另加1.5％瓊脂糖，pH2.5）平板上，30℃培養5～6d，挑取產生透明圈菌落在產酶培養基平板劃線分離，重複劃線分離過程3輪，使菌株純化。通過此方法篩選到該分泌甘露聚糖酶的菌株。
該菌株在PDA上30℃下培養7d菌落直徑2～3厘米，灰黑色或灰褐色，呈圓形放射狀，表面有絨狀皺褶且不易於挑起。分生孢子梗直立，（6～9）微米×（10～13）微米。頂端產生鏈生孢子，分生孢子有隔，0～1隔，橢圓形至紡錘形，無分枝，棕色至深棕色，（5～8.25）微米×（10～19）微米。其最適生長pH為2.5～3.0，最適溫度30℃。
該嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1，於2008年5月19日保存於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（北京市朝陽區大屯路，中國科學院微生物研究所，100101），其保藏號為：CGMCCNo.2500。
- 實施例2
嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1β-甘露聚糖酶編碼基因man5A的克隆
提取嗜酸真菌Bisporasp.MEY-1基因組DNA：將液體培養3天的菌絲體用無菌濾紙過濾放入研缽中，加入2毫升提取液，研磨5分鐘，然後將研磨液置於50毫升離心管中，65℃水浴鍋裂解20分鐘，每隔10分鐘混勻一次，在4℃下每分鐘的旋轉次數10000，離心5分鐘。取上清於酚/氯仿中抽提除去雜蛋白，再取上清加入等體積異丙醇，於室溫靜置5分鐘後，4℃下每分鐘的旋轉次數10000，離心10分鐘。棄上清，沉澱用70％的乙醇洗滌兩次，真空乾燥，加入適量TE溶解，置於-20℃備用。
根據已發表的甘露聚糖酶基因保守序列設計合成了兼併引物P1，P2。以Bisporasp.MEY-1總DNA為模板進行PCR擴增。PCR反應參數為：95℃變性5分鐘後冷卻至4℃；然後94℃變性30sec，53℃退火30sec，72℃延伸30sec，32個循環後72℃保溫8分鐘。得到一約150bp片段，將該片段回收後送三博生物技術有限公司測序。
根據測序得到的核甘酸序列設計TAIL-PCR引物usp1，usp2，usp3；dsp1，dsp2，dsp3（見表1）。通過TAIL-PCR得到已知基因序列的側翼序列，擴增得到產物回收後送三博生物技術有限公司測序。測序正確的片斷經拼接後獲得全長基因。
表1.甘露聚糖酶基因克隆的簡併引物及TAIL-PCR特異性引物。
- 實施例3
β-甘露聚糖酶基因的RT-PCR分析
提取Bisporasp.MEY-1的總RNA，利用反轉錄酶得到cDNA的一條鏈，然後設計恰當的引物（MAN5AF：5′-ATGCTTTTTCAAGTGGGAACAGTGCTTTTATTGGCC-3′，MAN5AR：5′-TTACACAGGCTTCTCCAGCATTGCCGC-3′）擴增該單鏈cDNA，獲得甘露聚糖酶的cDNA序列，擴增得到產物回收後送三博生物技術有限公司測序。
通過比較甘露聚糖酶酶的基因組序列和cDNA序列後發現該基因有3個內含子，cDNA長1275bp，編碼424個胺基酸和一個終止密碼子，N端18個胺基酸為其預測的信號肽序列，所測出的基因man5A的成熟蛋白部分核甘酸序列與GeneBank上的甘露聚糖酶基因序列進行同源比較，胺基酸序列最高一致性為47.1％，核苷酸序列一致性為45.4％，證明從Bisporasp.MEY-1中分離克隆得到的編碼甘露聚糖酶的基因為新基因。
- 實施例4
重組β-甘露聚糖酶的製備
將表達載體pPIC9進行雙酶切（SnaBI+NotI），同時將編碼甘露聚糖酶的基因man5A雙酶切（SnaBI+NotI），切出編碼成熟甘露聚糖酶的基因片段與表達載體pPIC9連線，獲得含有Bisporasp.MEY-1甘露聚糖酶基因man5A的重組質粒pPIC-man5A並轉化畢赤酵母GS115，獲得重組畢赤酵母菌株GS115/man5A。
取含有重組質粒的GS115菌株，接種於400毫升BMGY培養液中，30℃250每分鐘的旋轉次數振盪培養48小時後，離心收集菌體。然後於200毫升BMMY培養基重懸，30℃每分鐘的旋轉次數250振盪培養。誘導72小時後，離心收集上清。測定甘露聚糖酶的活力。重組甘露聚糖酶的表達量為64U/毫升。SDS-PAGE結果（圖1）表明，重組甘露聚糖酶在畢赤酵母中得到了表達。所表達的甘露聚糖酶經過純化之後，其蛋白質的含量達到總蛋白的90％以上（圖1）。
- 實施例5
重組β-甘露聚糖酶的活性分析
採用DNS法對《一種嗜酸β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和套用》的甘露聚糖酶進行活性分析。具體方法如下：在pH1.5，65℃條件下，1毫升的反應體系包括100微升適當的稀釋酶液，900微升底物，反應10分鐘，加入1.5毫升DNS終止反應，沸水煮5分鐘。冷卻後540納米測定OD值。
甘露聚糖酶活性單位定義：在一定條件下，每分鐘分解甘露聚糖生成1微米ol還原糖所需的酶量為1個活性單位（IU）。
- 實施例6
甘露聚糖酶MAN5A的最適pH及pH穩定性
經純化的甘露聚糖酶MAN5A在不同的pH下進行酶促反應以測定其最適pH。所用緩衝液為pH0.5～2.2KCl-HCl緩衝液，pH2.2～8.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉系列緩衝液及pH8.0～10.0Tris-HCl系列緩衝液。純化的甘露聚糖酶MAN5A在不同pH的緩衝體系，65℃下測定的pH適性結果（圖2）表明：MAN5A的最適pH為1.0～1.5，在pH1.0～5.0範圍內，酶活性維持在75％以上，而在pH8.0以上，基本檢測不到酶活性。
將酶液在不同pH值的緩衝液中於37℃下處理60分鐘，再測定酶活性以研究酶的pH穩定性。結果表明（圖3），在pH1.0～12.0之間保持最適pH下酶活的95％以上，這說明此酶具有較好的耐酸耐鹼性。
- 實施例7
甘露聚糖酶MAN5A酶反應最適溫度及熱穩定性
最適溫度的測定在pH1.5緩衝體系及不同溫度下進行酶促反應。耐溫性測定為甘露聚糖酶在不同溫度下處理不同時間，再在65℃下進行酶活性測定。酶反應最適溫度測定結果（圖4）表明，其最適溫度為65℃。酶的熱穩定性試驗表明（圖5），MAN5A在60℃下保溫60分鐘，剩餘酶活性為70％，70℃下保溫20分鐘，剩餘酶活性為50％，80℃下保溫2分鐘，剩餘酶活性為46％。這表明MAN5A具有較好的熱穩定性。
- 實施例8
不同化學試劑甘露聚糖酶MAN5A酶活性的影響
在酶促反應體系中加入不同的化學試劑（終濃度分別為1毫摩爾每升/L，5毫摩爾每升/L和10毫摩爾每升/L），研究不同化學試劑對酶活性的影響。結果表明：低濃度的Li、Ca、Co、Cr、Cu、Mn和Ag對酶活有明顯的激活作用。Hg和SDS對MAN5A有抑制作用，其餘金屬離子在低濃度時對MAN5A的酶促反應無顯著影響。高濃度的Ni、Fe和β-巰基乙醇對酶活有明顯的激活作用。高濃度Li、Cu和Pb對酶活有一定的抑制。而Hg和SDS對酶活有抑制作用。高濃度的其它離子對酶活影響不大。（表2）。
表2各種化學試劑對甘露聚糖酶MAN5A活力的影響
注“：-”代表無法檢測。
- 實施例9
甘露聚糖酶MAN5A的抗胰蛋白酶和胃蛋白酶能力
用pH2.0KCl-HCl緩衝液配製0.1毫克/毫升胃蛋白酶，pH7.0Tris-HCl緩衝液配製0.1毫克/毫升胰蛋白酶。取pH2.0KCl-HCl緩衝液稀釋後的0.5毫升純化的酶液加入0.5毫升胃蛋白酶，pH7.0Tris-HCl緩衝液稀釋後的0.5毫升純化的酶液加入0.5毫升胰蛋白酶混合，蛋白酶/甘露聚糖酶（w/w）≈0.1，37℃保溫，0、2、5、8、10、20、30和60分鐘取樣，在pH1.5及65℃條件下測定酶活性。實驗結果表明β-甘露聚糖酶MAN5A用胃蛋白酶和胰蛋白酶處理60分鐘後，酶活性均沒有降低。相反，用胰蛋白酶處理後酶活有10％的提高。說明β-甘露聚糖酶MAN5A具有非常好的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶水解的能力（圖6）。胃蛋白酶和胰蛋白酶處理後的β-甘露聚糖酶MAN5A經SDS-PAGE分析表明：胃蛋白酶和胰蛋白酶處理後的β-甘露聚糖酶MAN5A的分子量均略有降低（圖7）。但並沒有降低其活性。
- 實施例10
甘露聚糖酶降解角豆膠和魔芋粉的產物
在500微升0.5％的角豆膠和魔芋粉中分別加入100微升純化的酶液，pH1.5，65℃下保溫3～4小時。用無水乙醇將酶蛋白沉澱，上清液用2500色譜儀，利用高效陰離子交換色譜-脈衝安培（HPAEC-PAD）檢測方法，進行產物中糖種類的分析。分析結果表明：甘露聚糖酶MAN5A降解角豆膠的產物主要是甘露糖，甘露二糖，甘露三糖，和其它寡聚糖。產物中甘露糖含量為13.38％，甘露二糖含量為5.21％，甘露三糖含量為28.91％，其它寡聚糖的含量為52.49％。MAN5A降解魔芋粉的產物主要是甘露糖，甘露二糖，甘露三糖，甘露四糖和其它寡聚糖。產物中甘露糖含量為27.03％，甘露二糖含量為6.29％，甘露三糖含量為16.24％，甘露四糖的含量為1.21％，其它寡聚糖的含量為49.25％。
