一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途:專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,

《一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途》是成都華神集團股份有限公司製藥廠於2004年11月9日申請的專利，該專利申請號為2004100906065，公布號為CN1771978，公布日為2006年5月17日，發明人是萬方、袁毓湘、李明勁，該發明屬於中藥領域。

《一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途》基本上由人參皂苷Rg₁、Re和三七皂苷R₁組成，其中人參皂苷Rg₁的含量為30～70wt％，人參皂苷Re的含量為4～15wt％，三七皂苷R₁的含量為7～25wt％，以及人參皂苷Rg₁、Re和三七皂苷R₁的含量之和最高為98wt％。該發明提供的三七三醇皂苷組合物對於血管栓塞性疾病的治療具有更強的針對性。該組合物可以用於製備治療血管栓塞性疾病的藥物。

2021年11月，《一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途》獲得2020年度四川專利獎二等獎。

基本介紹

中文名：一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途
公布號：CN1771978
公布日：2006年5月17日
申請號：2004100906065
申請日：2004年11月9日
申請人：成都華神集團股份有限公司製藥廠
地址：四川省成都市
發明人：萬方、袁毓湘、李明勁
專利代理機構：北京天昊聯合智慧財產權代理有限公司
代理人：張天舒
Int.Cl.：A61K31/704(2006.01)、A61K36/258(2006.01)、A61P7/02(2006.01)、A61P9/10(2006.01)
類別：發明專利

專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,改善效果,權利要求,實施方式,榮譽表彰,

專利背景

三七（Panax notoginseng（Burk.）F.H.chen）又稱田七、人參三七、田三七、山漆、金不換和血參等，為五加科（Araliaceae）人參屬（Panax Linn）多年生草本植物，因其播種後三至七年挖采而且每株長三個葉柄，每個葉柄生七個葉片，故名三七，其莖、葉、花均可入藥，是中國特有的名貴中藥材。據有關文獻記載，三七使用歷史近600年，栽培歷史近500年。三七因其自古以來就被公認為具有顯著的活血化瘀、消腫定痛功效而被譽為“金不換”、“南國神草”。

中國專利申請93105774（公開號：CN1083819A，公開日：1994年3月16日）公開了一種三七總皂苷的製備方法。中國專利申請01108591（公開號：CN1334267A，公開日：2002年2月6日）也公開了一種三七總皂苷的製備方法。中國專利申請02144840（公開號：CN1412162A，公開日：2003年4月23日）、02158727（公開號：CN1424321A，公開日：2003年6月18日）也都分別公開了一種從三七莖葉中提取三七總皂苷的方法。

上述中國專利申請所描述的方法均在於提取或製備三七總皂苷。三七總皂苷屬達瑪烷型四環三萜類皂苷，按照其結構特點可進一步分為原人參二醇型和原人參三醇型兩類。由於這兩類皂苷結構的不同，它們的生物學活性也大不相同，人參二醇型皂苷具有較強的直接抗炎鎮痛作用，而人參三醇型皂苷則具有較強的抑制血小板聚集、抑制血栓形成的作用。而2004年11月之前基於這種三七總皂苷的藥物製劑很難針對具體的病症發揮出更大的有針對性的藥效。因此，人們需要從三七中分離出含有不同組分的有效部位，以便能提供出對具體的病症更加適合的三七藥物。

發明內容

專利目的

《一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途》的一個目的是提供一種以人參皂苷Rg₁、Re和三七皂苷R₁為主要成分的三七三醇皂苷組合物。

該發明的另一個目的是提供該發明三七三醇皂苷組合物的製備方法。

該發明的又一個目的是提供該發明三七三醇皂苷組合物的製藥用途。

該發明的再一個目的是提供該發明三七三醇皂苷組合物用於治療疾病的用途。

技術方案

《一種三七三醇皂苷組合物及其製備方法和用途》的一個技術方案提供了一種三七三醇皂苷組合物，該組合物是由三七提純得到的，其基本上由人參皂苷Rg₁、Re和三七皂苷R₁組成；其中Rg₁的含量為30～70wt％，優選為40～65wt％，更優選為50～65wt％，最優選為55～65wt％；人參皂苷Re的含量為4～15wt％，優選為4～10wt％，更優選為6～9wt％；三七皂苷R₁的含量為7～25wt％，優選為8～18wt％，更優選為10～15wt％；以及人參皂苷Rg₁、Re和三七皂苷R₁的含量之和最高為98wt％。

該發明提供的三七三醇皂苷組合物的主要組分的分子式和結構式如下表1中所示：

表1

在該發明的上述技術方案中所述三七三醇皂苷組合物還可含有微量的人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1、三七皂苷R₂和/或三七皂苷R₃。

改善效果

該發明提供的三七三醇皂苷組合物，具有以下優點：

（1）在藥效學方面，該組合物對於心腦血管栓塞性疾病的病理生理過程具有更強的針對性，能夠更有效地抑制血栓的形成和發展，並促進血栓的溶解和血管的疏通；（2）在藥理作用方面，該組合物的針對性明顯優於2004年11月之前技術中的三七總皂苷製劑。

該發明的另一個技術方案提供了該發明三七三醇皂苷組合物的製備方法，該方法包括以下步驟：

（1）用濃度為50～90wt％、優選55～70wt％、最優選約60wt％的乙醇浸泡提取三七，所用的乙醇量為所用三七重量的至少3倍，收集乙醇提取液；

（2）使所述乙醇提取液通過苯乙烯型大孔樹脂柱，優選使用非極性或弱極性的苯乙烯型大孔樹脂，這些樹脂包括但不限於D101、D140、Dj-1或D201；

（3）用濃度為30～50wt％、優選35～45wt％、最優選約40wt％的乙醇對所述苯乙烯型大孔樹脂柱進行洗脫，收集洗脫液。優選的是，在用所述乙醇進行洗脫前，用水對苯乙烯型大孔樹脂柱進行洗脫，以除去水溶性雜質。

在該發明的上述技術方案中所述步驟（1）中使用乙醇的濃度約60wt％是指其濃度在可接受誤差範圍內，一般為60±3wt％。所述步驟（3）中使用乙醇的濃度約40wt％是指其濃度在可接受誤差範圍內，一般為40±2wt％。

在上述步驟（1）和步驟（3）中，對所使用的乙醇量沒有太多限制。但對於步驟（1）而言，一般所用的乙醇量為所用三七重量的3～15倍。如果所用的乙醇量太少，則浸泡提取不充分，但是如果用的乙醇量太多，將會導致乙醇的浪費並使後續的乙醇回收步驟的能源成本增加。同樣對於步驟（3）而言，一般所用的乙醇量為所用三七量的1～15倍。如果所用的乙醇量太少，則洗脫不充分，但是如果用的乙醇量太多，將會導致乙醇的浪費並使後續的乙醇回收步驟的能源成本增加。

為了提高提取的效率，在該發明三七三醇皂苷組合物的製備方法中所述步驟（1）用乙醇對三七進行浸泡提取前，從有利於後續步驟的效率考慮，需要將三七進行粉碎。優選將三七粉碎成粒徑範圍在《中國藥典》2000年版一部（化學工業出版社，2000年1月出版）規定的最粗粉和粗粉之間，對於粉碎的方式沒有任何限制。

因此，該發明三七三醇皂苷組合物的製備方法中所述步驟（1）優選實施方式如下：

（a）將三七粉碎，得三七粉；（b）採用濃度為50～90wt％、優選55～70wt％、最優選約60wt％的乙醇對所述步驟（a）所得的三七粉進行浸泡，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少2倍；和（c）採用濃度為50～90wt％、優選55～70wt％、最優選約60wt％的乙醇對所述步驟（b）所得的浸泡後的三七粉進行滲漉，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少1倍，收集滲漉液。

在該發明的上述技術方案中所述步驟（b）和步驟（c）中使用乙醇的濃度約60wt％是指其濃度在可接受誤差範圍內，一般為60±3wt％。

在上述步驟（b）中浸泡三七粉所用的乙醇量和步驟（c）中滲漉所用的乙醇量都沒有太多限制。但浸泡三七粉的所用乙醇量的合理範圍一般為所用三七粉重量的2～4倍，滲漉所用乙醇量的合理範圍一般為所用三七粉重量的1～15倍。如果浸泡三七粉的所用乙醇量和滲漉所用乙醇量低於上述範圍的下限的話，則不能充分有效地浸泡提取出三七中的有效成份，但如果所用的乙醇量超過上述範圍的上限的話，提取效率也不會再有提高，而且還會導致乙醇的浪費並使後續的乙醇回收步驟的能源成本增加。

如果需要，還可進一步將步驟（3）收集的洗脫液進行濃縮，得三七三醇皂苷醇浸膏，並對上述三七三醇皂苷醇浸膏進行乾燥。所述的濃縮步驟可以採用任何常規的方法，但優選採用減壓濃縮的方法。所述的乾燥步驟可以採用各種手段，如噴霧乾燥、減壓乾燥等。為了獲得有效成分更高的三七三醇皂苷組合物，還可進一步對步驟（3）收集的洗脫液、對步驟（3）收集的洗脫液的濃縮產物或濃縮乾燥產物進行進一步的純化精製，所述的純化精製步驟可以採用各種手段，包括但不限於柱層析、溶劑萃取等。在採用柱層析進行純化時，優選使用弱鹼性陰離子交換樹脂，這些樹脂包括但不限於BS-II、D301或D313。採用萃取方法時，可以使用的溶劑有：正丁醇或乙酸乙酯等。

為了降低成本，在該發明三七三醇皂苷組合物的製備方法中，還可回收所述步驟（1）中收集的乙醇提取液、步驟（c）中收集的滲漉液或步驟（3）中收集的洗脫液中的乙醇，優選採用減壓回收方式。

該發明提供的三七三醇皂苷組合物的製備方法能夠有效分離三七總皂苷中的三七三醇類皂苷有效成分；而且該製備方法所用的溶劑安全、廉價易得、無殘留，並且溶劑也可回收利用，降低了製備成本。

該發明的又一個技術方案提供了一種三七三醇皂苷組合物用於製備治療血管栓塞性疾病的藥物的套用，特別是用於製備治療心腦血管栓塞性疾病的藥物的套用。所述的心腦血管栓塞性疾病包括腦卒中、冠心病、心絞痛、心肌梗死、視網膜中央靜脈阻塞等，中風症見半身不遂、口舌歪斜、言語蹇澀、偏身麻木等。

該發明提供的三七三醇皂苷組合物可以被製成各種劑型，例如，顆粒劑、合劑、片劑、散劑、蜜丸、膠囊、注射劑、滴劑、貼劑等劑型。製備這些劑型的方法和所用的助劑是本領域的技術人員已知的，例如，可參見《中藥藥劑學》（上海科學技術出版社，1986年11月出版）、《藥用輔料大全》（四川科學技術出版社，1995年1月出版）、《中國藥典》2000年版一部（化學工業出版社，2000年1月出版）等。

對於該發明藥物單劑所含的該發明三七三醇皂苷組合物的含量沒有具體的限制，例如，可在50～500毫克/劑。對於該發明藥物製劑的給藥途徑也沒有過多的限制，例如可以通過口服、灌胃、肌肉內注射、血管內注射、透皮、十二指腸給藥、鼻內給藥等方式。該發明的上述製劑具有活血化瘀，活絡通脈，抗血小板聚集，防止血栓形成，改善微循環，降低全血粘度，增強頸動脈血流量的功效，因此可主要用於心腦血管栓塞性病症，例如中風、半身不遂、口舌歪斜、言語蹇澀、偏身麻木的治療。

該發明還提供了一種治療血管栓塞性疾病的方法，其特徵在於，給需要治療的患者施用有效劑量的該發明三七三醇皂苷組合物。所述的血管栓塞性疾病包括但不限於心腦血管栓塞性疾病：例如，中風、半身不遂、口舌歪斜、言語蹇澀、偏身麻木等。所述的患者包括人，也包括貓、狗、猩猩、猴子等動物。所述的有效劑量會隨患者的疾病嚴重程度、體重、體質、年齡、患病歷史等因素有所變化。但是，醫師或藥劑師有能力為不同的患者確定出合適的服用量。例如，可在1～15毫克/千克體重/天的範圍內選擇，優選在2～10毫克/千克體重/天的範圍內選擇。

權利要求

1.一種三七三醇皂苷組合物，該組合物是由三七提純得到的，其基本上由人參皂苷Rg₁、Re和三七皂苷R₁組成，其特徵在於，所述人參皂苷Rg₁的含量為50～60wt％，所述人參皂苷Re的含量為6～9wt％，所述三七皂苷R₁的含量為10～15wt％。

2.根據權利要求1所述的三七三醇皂苷組合物，其特徵在於，所述人參皂苷Rg₁的含量為50～55wt％。

3.權利要求1或2所述的三七三醇皂苷組合物，其為顆粒劑、合劑、片劑、散劑、蜜丸、膠囊、注射劑、滴劑或貼劑。

4.權利要求1所述的三七三醇皂苷組合物的製備方法，該方法包括以下步驟：

（1）用濃度為55～70wt％的乙醇浸泡提取三七，所用的乙醇量為所用三七重量的至少3倍，收集乙醇提取液；

（2）使所述乙醇提取液通過苯乙烯型大孔樹脂柱；和

（3）用濃度為35～45wt％的乙醇對所述苯乙烯型大孔樹脂柱進行洗脫，收集洗脫液；其特徵在於，所述步驟（1）是如下完成的：

（a）將三七粉碎，得三七粉；（b）採用濃度為55～70wt％的乙醇對所述步驟（a）所得的三七粉進行浸泡，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少2倍；和（c）採用濃度為55～70wt％的乙醇對所述步驟（b）所得的浸泡後的三七粉進行滲漉，所用的乙醇量為所用三七粉重量的至少1倍，收集滲漉液。

5.根據權利要求4所述的三七三醇皂苷組合物的製備方法，其特徵在於，在所述步驟（b）和步驟（c）中所用乙醇的濃度為60wt％。

6.根據權利要求4所述的三七三醇皂苷組合物的製備方法，其特徵在於，在所述步驟（3）洗脫樹脂用乙醇的濃度為40wt％。

7.根據權利要求4-6任一項所述的三七三醇皂苷組合物的製備方法，其特徵在於，還包括以下步驟：將所述步驟（3）收集的洗脫液進行濃縮得三七三醇皂苷醇浸膏。

8.根據權利要求4-6任一項所述的三七三醇皂苷組合物的製備方法，其特徵在於，還包括以下步驟：將所述步驟（3）收集的洗脫液，採用柱層析或溶劑萃取的方法進行進一步純化。

9.根據權利要求7所述的三七三醇皂苷組合物的製備方法，其特徵在於，還包括以下步驟：對所述三七三醇皂苷醇浸膏進行乾燥。

10.權利要求1或2所述的三七三醇皂苷組合物用於製備治療血管栓塞性疾病的藥物的套用。

實施方式

實施例1

使用萬能粉碎機（購自上海天和製藥機械廠，型號GF-300）粉碎三七乾燥根莖150千克（產地：雲南省文山州），至粒徑範圍10目～24目的三七粗粉，用2倍藥材重量的濃度為60wt％乙醇浸泡上述三七粗粉後填入滲漉桶，用15倍藥材重量的濃度為60wt％7醇對濕料進行滲漉，減壓回收滲漉液中的乙醇後得三七總皂苷醇浸膏。將上述三七總皂苷醇浸膏用純化水配製成10倍藥材重量的溶液，將所得水溶液上樣到苯乙烯型大孔樹脂D140（購自成都中藍晨光化工研究院）柱，先用5倍藥材重量的純化水洗脫，再對經純化水洗脫的樹脂柱用9倍藥材重量的濃度為40wt％乙醇洗脫，流速為0.2倍柱體積/小時，然後收集洗脫液。對上述洗脫液進行減壓濃縮，回收乙醇得醇浸膏，並對所得醇浸膏噴霧乾燥，即得6千克粉末狀的三七三醇皂苷組合物。為簡明起見，下文中有時將三七三醇皂苷組合物簡稱為PTS。

通過高效液相色譜法，採用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈-水（體積比為19.5:80.5）為流動相，檢測波長為210納米，分別測定實施例1製得的PTS中Rg₁含量為60wt％、Re含量為7wt％、R₁含量為12wt％。

實施例2～4

按照與實施例1所述的相同的方法和步驟，採用不同濃度、不同重量的乙醇對三七粗粉進行浸泡、滲漉和洗脫，獲得了下列該發明的組合物，結果如下表所示：

實施例	所用三七藥材重量	浸泡、滲漉用乙醇的濃度和用量	採用樹脂、洗脫樹脂用乙醇的濃度和用量	PTS的重量和主要組分的含量
實施例2	1千克	浸泡用乙醇濃度為 75wt％，用量為2倍藥材重量滲漉用乙醇濃度為75wt％，用量為9倍藥材重量	D101（購自天津農藥廠）50wt％2倍藥材重量	PTS的重量：0.0735千克 Rg₁：35.01wt％ Re：4.445wt％ R₁：11.56wt％
實施例3	1千克	浸泡用乙醇濃度為 60wt％，用量為2倍藥材重量滲漉用乙醇濃度為60wt％，用量為9倍藥材重量	D101（購自天津農藥廠）40wt％1.5倍藥材重量	PTS的重量：0.0556千克 Rg₁：60.72wt％ Re：7.535wt％ R₁：12.23wt％
實施例4	1千克	浸泡用乙醇濃度為 60wt％，用量為2倍藥材重量滲漉用乙醇濃度為60wt％，用量為9倍藥材重量	D140（購自成都中藍晨光化工研究院）30wt％1.5倍藥材重量	PTS的重量：0.0184千克 Rg₁：47.415wt％ Re：6.505wt％ R₁：16.15wt％

實施例5

取實施例1製得的乾燥的PTS100克，用pH值為6的乙酸緩衝液配製成2.5升溶液，將所得溶液上樣到弱鹼性陰離子交換樹脂BS-II（購自成都中藍晨光化工研究院）柱，樹脂柱體積為6升，用pH值為6的乙酸緩衝液12升洗脫，流速為0.4倍柱體積/小時，收集洗脫液，對所得洗脫液濃縮乾燥，即得60克粉末狀的精製三七三醇皂苷組合物。

通過高效液相色譜法，採用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈-水（體積比為19.5:80.5）為流動相，檢測波長為210納米，分別測定實施例5製得的PTS中Rg₁含量為65wt％、Re含量為8wt％、R₁含量為20wt％。水分含量約為5wt％，另外還含有約2wt％的雜質。

實施例6

取實施例1製得的乾燥的PTS100克，溶於濃度為50wt％的乙醇中，加澱粉100克，混勻，用一步制粒機制粒，充填製成膠囊1000粒。

試驗例1對血小板聚集功能和釋放功能的影響

採用比濁法，利用PAM-3型雙通道血小板聚集儀（購自江蘇省丹陽無線電廠），對該發明組合物的抑制血小板聚集的功能進行體內實驗評價。健康雄性SD大鼠，分為大（150毫克/千克）、中（75毫克/千克）、小（37.5毫克/千克）三個劑量組和1個阿斯匹林陽性對照組（300毫克/千克）。將實施例1製得的PTS粉末用生理鹽水配成溶液，按照預定的劑量十二指腸給藥所製成的PTS溶液。給藥一次，1小時後，腹主動脈取血，製備富血小板血漿，加入濃度為3×10摩爾升的誘導劑二磷酸腺苷（ADP）。實驗結果表明：實施例1製得的PTS能明顯抑制由ADP誘導的大鼠血小板聚集，並隨劑量增加作用增強，其抑制ADP引起的血小板聚集作用強度與阿斯匹林基本相當。

採用比濁法，利用PAM-3型雙通道血小板聚集儀（購自江蘇省丹陽無線電廠），對該發明組合物的抑制血小板聚集的功能進行體外實驗評價。首先用生理鹽水將實施例1製得的PTS粉末配成溶液，濃度分別為1、2、4毫克/毫升。取健康雄性家兔，頸總動脈取血，製備富血小板血漿後，用等體積的所製成的PTS溶液稀釋，再向上述稀釋後的血漿中加入濃度為3×10摩爾升的誘導劑ADP，誘導血小板聚集。實驗結果證明：實施例1製得的PTS具有明顯抑制由ADP誘導家兔血小板聚集的作用，該作用與劑量呈相關性，與阿斯匹林比較，與體內結果相似。

試驗例2對大鼠實驗性血栓的影響

取健康雄性SD大鼠42隻，體重300克以上，分為2個對照組和4個實驗組，每組7隻。用生理鹽水將實施例1製得的PTS粉末配成溶液，十二指腸給藥所製成的PTS溶液，4個實驗組的給藥劑量分別為25毫克/千克、50毫克/千克、100毫克/千克、200毫克/千克，給藥一次。陰性對照組十二指腸給藥和最大劑量實驗組等容量的蒸餾水，陽性藥物對照組灌胃給予阿司匹林（300毫克/千克），給藥一次。給藥1小時後，採用動靜脈旁路的方法進行手術，建立血循環。結果證明：實施例1製得的PTS50毫克/千克、100毫克/千克、200毫克/千克均能明顯抑制大鼠實驗性血栓的形成，劑量增加，作用增強。

試驗例3對小鼠出血時間的影響

取健康雄性昆明種小鼠40隻，分為1個對照組和3個實驗組，每組10隻。對照組腹腔注射給藥阿斯匹林（150毫克/千克，給藥一次），3個實驗組分別腹腔注射給藥實施例1製得的PTS粉末的生理鹽水溶液（濃度為50毫克/毫升），分為大（300毫克/千克）、中（150毫克/千克）、小（75毫克/千克）三個劑量組，給藥一次。給藥20分鐘後，將鼠尾尖部剪斷，以濾紙接血滴，每30秒接一次，直到無出血為止，記錄出血時間。結果證明：實施例1製得的PTS和阿斯匹林都有延長出血時間的趨勢，但無明顯差異。

試驗例4對沙土鼠實驗性腦缺血的影響

取沙土鼠50隻，隨機分為1個正常組、1個缺血對照組、1個陽性藥物對照組、2個實驗組，每組10隻。正常組正常飼養，未給予任何藥物，其餘各組採用沙土鼠單側頸總動脈結紮形成一側腦半球梗塞的實驗模型。實驗組腹腔注射給藥實施例1製得的PTS的生理鹽水溶液（濃度為50毫克/毫升），分為大（150毫克/千克）、小（75毫克/千克）兩個劑量組，每天給藥一次，連續10天。缺血對照組腹腔注射給予和大劑量實驗組等容量生理鹽水，每天給藥一次，連續10天。陽性對照藥物組灌胃給予尼莫地平60毫克/千克，每天給藥一次，連續10天。末次給藥1小時後，乙醚麻醉，觀察實施例1製得的PTS對局部腦缺血引起的腦功能障礙和腦組織鉀、鈉離子的影響。按照Butterfield等（1973年全國冠心病座談會資料選編，261頁，人民衛生出版社1974）的方法對動物進行行為評分，結果表明實施例1製得的PTS使沙土鼠實驗性腦缺血行為明顯改善，陽性對照藥物尼莫地平亦有明顯作用。對腦組織採用火焰發射分光光度法測定鉀、鈉離子的含量。結果表明缺血對照組沙土鼠缺血側大腦半球鈉含量增加，鉀含量降低。大劑量PTS（150毫克/千克）組鉀、鈉含量無明顯變化，小劑量PTS（75毫克/千克）組除鉀含量明顯降低外，鈉含量變化不顯著。尼莫地平亦有這樣對抗作用。

綜上所述，表明實施例1製得的PTS對沙田鼠試驗性腦缺血具有一定保護作用。

試驗例5對大鼠中腦動脈阻塞致腦梗塞的保護作用

（1）預防給藥

取雄性Wistar大鼠50隻，隨機分為缺血對照組、陽性藥物對照組、大劑量（200毫克/千克/天）實驗組、中劑量（100毫克/千克/天）實驗組、小劑量（50毫克/千克/天）實驗組，每組10隻。缺血對照組灌服蒸餾水4毫升/千克/天，陽性對照藥物組灌胃給予尼莫地平50毫克/千克/天。將實施例1製得的PTS粉末用生理鹽水配成懸浮液，對實驗組動物按照預定的劑量灌胃給藥。各組連續給藥7天。於末次給藥2小時後，對各組大鼠分別腹腔注射水合氯醛350毫克/千克麻醉，灼斷大鼠大腦中動脈引起腦梗塞。觀察實施例1製得的PTS預防給藥對局部腦缺血引起的腦功能障礙和梗塞範圍的影響。結果表明：連續灌服給藥7天（200、100、50毫克/千克/天）實施例1製得的PTS，對阻斷大鼠大腦中動脈所致腦梗塞有明顯療效，腦梗塞組織百分比減了54.2％。採用行為評分法，結果表明，與尼莫地平類似，高、中劑量實驗組可明顯改善其行為障礙。

（2）治療性給藥

取雄性Wistar大鼠50隻，按體重隨機分為缺血對照組、陽性藥物對照組、大劑量（200毫克/千克/天）實驗組、中劑量（100毫克/千克/天）實驗組、小劑量（50毫克/千克/天）實驗組，每組10隻。對各組大鼠分別腹腔注射水合氯醛350毫克/千克麻醉，灼斷大鼠大腦中動脈引起腦梗塞。將實施例1製得的PTS粉末用生理鹽水配成懸浮液，對實驗組動物按照預定的劑量灌胃給藥。缺血對照組灌服蒸餾水4毫升/千克/天，陽性對照藥物組灌胃給予尼莫地平50毫克/千克/天。各組連續給藥6天，於末次給藥2小時後，觀察阻塞後治療給藥實施例1製得的PTS對局部腦缺血引起的腦功能障礙和梗塞範圍的影響。結果表明：阻塞後連續灌服給藥6天（200、100、50毫克/千克/天）實施例1製得的PTS，對阻斷大鼠大腦中動脈所致腦梗塞的梗塞組織百分比減少了37.1％，亦明顯改善腦梗塞大鼠的行為障礙。

綜上所述，表明實施例1製得的PTS對大鼠局部腦缺血有保護作用。

試驗例6對大鼠血液粘度的影響

取健康雄性Wistar大鼠50隻，隨機分為2個對照組和3個實驗組，每組10隻，3個實驗組分別為大（80毫克/千克）、中（40毫克/千克）、小（20毫克/千克）三個劑量組。將實施例1製得的PTS粉末配成的生理鹽水溶液，3個實驗組按照預定劑量腹腔注射給藥所製得的PTS溶液，每天一次，共10天。陰性對照組腹腔注射給予和大劑量實驗組等容量的生理鹽水，陽性藥物對照組腹腔注射給予卡蘭30毫克/千克，每天一次，共10天。於最後一次給藥後1小時用戊巴比妥鈉40毫克/千克腹腔麻醉，腹主動脈取血，以3.8％枸櫞酸鈉水溶液抗凝，按血液粘度測定法測定血液粘度。

實驗結果表明，多次腹腔注射實施例1製得的PTS粉末後可明顯降低全血濃度，高劑量組降低顯著（P＜0.05），陽性對照藥卡蘭亦明顯降低全血粘度。大劑量組使紅細胞壓積明顯下降，對血漿比粘度和血沉無顯著影響。

試驗例7急性毒性試驗

選體重為18～22克的健康NIH小鼠50隻，隨機分為5組，每組10隻，雌雄各半。各組給藥劑量分別為4444.44毫克/千克、4000.00毫克/千克、3600.00毫克/千克、3240.00毫克/千克、2916.00毫克/千克，劑距比為1:0.9。用滅菌的生理鹽水將實施例1製得的PTS粉末配製成PTS溶液，按照預定劑量給各實驗組小鼠靜脈注射給藥所製得的PTS溶液，根據實驗結果計算LD₅₀（藥物半數致死量：即在急性毒性實驗中藥物引起實驗動物半數死亡的劑量）為3422.2毫克/千克（3261.8～3590.6），死亡前出現短暫的抽搐、驚跳、呼吸抑制繼而死亡。試驗例8長期毒性試驗將實施例1製得的PTS粉末用生理鹽水配成濃的懸浮液，用灌胃針以2克/千克體重/天的劑量給大鼠灌胃給藥，共90天。試驗結束後，評價大鼠的生理情況。結果發現，試驗大鼠飲食正常，體重增長正常，血液學、血液生化指標無明顯影響，組織學檢查各臟器未見明顯病變。

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