《λ Red系統引入抗性的去除與APEC突變株致病作用的放大》是依託揚州大學，由高崧擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：λ Red系統引入抗性的去除與APEC突變株致病作用的放大
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：高崧
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
以λRed重組系統突變禽致病性大腸桿菌(APEC)E058株neuC基因，獲得中間突變株E058△neuC∷cat和最終突變株E058△neuC，相對於E058△neuC∷cat，E058△neuC在攻毒雞的肝、肺和腎中的致病作用被顯著放大（P小於0.05），RT-PCR結果表明，E058△neuC∷cat中的neuC已失活，而E058△neuC卻能產生意外轉錄本（neuC′），推測突變株致病作用的放大與neuC ′的產生有關。申請項目以同樣方法突變APEC E058株ompT基因，以證明上述現象的普遍性；以編碼意外轉錄本neuC ′、ompT ′的基因拯救E058△neuC∷cat和E058△ompT∷cat，考察其致病作用的放大；對意外轉錄本的編碼基因進行連續突變，探討突變株致病作用放大的分子機制。本項目對深入了解λRed系統的工作原理和套用該系統構建突變株及研製活菌苗，均具有重要意義。
結題摘要
以λ Red重組系統構建ompT基因突變株，對其定居、持續能力進行了評價。結果表明，與E058ΔneuC相似，即無抗性突變株E058ΔompT的致病作用被放大了，闡明了同一現象在不同基因中的重現率。構建含意外轉錄本編碼基因的重組表達質粒，對有抗性“中間體”突變株E058ΔneuC∷cat、E058ΔompT∷cat進行拯救，證實部分含1/4 neuC基因、1/4質粒ompT基因的意外轉錄本確實導致了E058ΔneuC、E058ΔompT致病作用的放大。通過克隆、表達，證明neuC’意外轉錄子可成功表達相應的蛋白。對能放大無抗突變株致病作用的1/4質粒ompT基因中的酶活性位點關鍵胺基酸進行點突變，證明單個點突變株的致病性未見明顯下降。申請項目無論對λRed重組系統，工作原理深入了解，還是對套用該系統構建突變株和研製活菌苗，均具有重要意義。
