限制酶在一些特定條件下使用時，對於底物DNA的特異性可能降低。即可以把與原來識別的特定的DNA序列不同的鹼基序列切斷，這個現象叫Star活性。Star活性出現的頻率，根據酶、底物DNA、反應條件的不同而不同。
基本介紹
- 中文名：star活性
- 作用：DNA序列不同的鹼基序列切斷
- 出現的因素：低粒子強度
- 抑制方法：使用較少的酶進行完全消化反應
出現因素,引起原因,抑制方法,
出現因素
導致Star活性出現的因素包括：低粒子強度、高pH值以及過高的甘油濃度(> 5% v/v）。尤其是最後一點，因為一般限制酶生產商提供的緩衝液（buffer）都含有較高的甘油濃度（典型為50% v/v），如果稀釋不充分就有可能導致Star活性的出現。當有一個以上酶切位點時，該問題顯得更加突出。
引起原因
1. 較高的甘油濃度 (>5% v/v)。
2. 酶與底物DNA比例過高 (不同的酶情況不同，通常為>100 U/μg)。
3. 低鹽濃度 (<25 mM)。
4. 高pH值 (pH>8.0)。
5. 存在有機溶劑 (如DMSO、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙醯胺、二甲基甲醯胺等)。
6. 用其他二價離子替代鎂離子 (如Mn，Cu，Co，Zn等)。 Star活性是內切酶的一種普遍現象，但是大多數可以控制，正常情況下使用提供的緩衝液就不會出現Star活性。
抑制方法
1. 儘量使用較少的酶進行完全消化反應。這樣可以避免過度消化以及過高的甘油濃度。
2. 儘量避免有機溶劑 (如製備DNA時引入的乙醇)的污染。
3. 將離子濃度提高到100～150 mM (若酶活性不受離子強度影響)。
4. 將反應緩衝液的pH值降到7.0。
5. 二價離子使用Mg。
