《siRNA沉默ATM基因對人膠質瘤幹細胞放射敏感性的影響》是依託重慶大學，由王東林擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：siRNA沉默ATM基因對人膠質瘤幹細胞放射敏感性的影響
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王東林
- 依託單位：重慶大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
放療是神經膠質瘤的主要治療手段之一，輻射抵抗是腦膠質瘤放療療效差和治療失敗的重要原因，腫瘤幹細胞的發現和分離為膠質瘤的治療提供了新的思路。本研究通過分離、培養人腦膠質瘤幹細胞，直線加速器不同劑量單次照射後，採用彗星分析法檢測輻射所致腫瘤細胞DNA單鏈、雙鏈斷裂，觀測放射損傷及修復情況；通過克隆形成率繪製細胞存活曲線，觀測SF2等指標變化；同時檢測細胞周期變化和細胞凋亡情況，觀測人腦膠質瘤幹細胞的放射敏感性及其相關分子基礎，為深入了解膠質瘤幹細胞的放射敏感性提供實驗依據。在此基礎上，通過siRNA干擾技術沉默放射敏感相關的ATM基因表達，觀察阻斷ATM基因表達後膠質瘤幹細胞的放射敏感性變化，探索以腫瘤幹細胞為靶細胞的腫瘤治療新途徑。
結題摘要
膠質瘤的放療抵抗是臨床治療的難題，需要聯合其它治療策略提高治療效果。不同實驗室已證實，膠質瘤細胞（GC）的放療抵抗與腫瘤中ATM基因的高表達有關，故可採用抑制ATM基因的表達，以達到提高腫瘤的放療敏感性。研究發現膠質瘤幹細胞（GSC）與放療抵抗相關，由此我們推測GSC中是否也存在ATM高表達表況，是否可通過沉默ATM基因以提高膠質瘤的放療敏感性。 我們從以下幾個方面進行研究：1、膠質瘤幹細胞的誘導和鑑定； 2、比較GC和GSC放療敏感性的差異；3、採用siRNA干擾策略沉默ATM基因，並進行干擾效的檢測；4、通過體內、體外實驗檢測siRNA-ATM後GSC放療敏感性的變化。 我們採用無血清培養基成功誘導並培養GSC，並採用CD133、nestin螢光雙標法、裸鼠成瘤實驗對GSC進行鑑定。電離輻照後，發現GSC的細胞克隆形成率、存活曲線高於GC，GSC的凋亡比例、G2期細胞阻滯比例、慧星拖尾比例低於GC（p＜0.05）。採用western blot檢測ATM、P53、che2細胞周期檢查點蛋白水平，發現GSC組的三者蛋白表達明顯高於GC組。 通過siRNA法沉默ATM基因後，並分三組：干擾組（siRNA-ATM,A）、空載組（siRNA-HK,N）、空白組（control,C），採用western blot和RTQ-PCR方法檢測，發現干擾組的ATM基因和蛋白表達均比空載組、空白組明顯降低；電離輻照後，通過放療敏感性方法檢測後發現，干擾組的克隆形成實驗、存活曲線低於空載組、空白組，干擾組的細胞凋亡比例、G2期阻滯比例、慧星拖尾比例明顯高於空載組、空白組（p＜0.01），干擾組的細胞增殖數量明顯低於空載組、空白組（p＜0.05或0.01）。 我們將轉染了siRNA-ATM（干擾組）和siRNA-HK（空載組）的膠質瘤幹細胞分別移植到裸鼠皮下，行放療後4周處死裸鼠行病理檢查，發現干擾組的腫瘤出血、壞死明顯多於空載組。通過研究比較，我們發現GSC比GC更加放療抵抗。採用基因干擾的策略將ATM基因表達沉默，通過體內外實驗提高GSC的放療敏感性，該研究為膠質瘤的放療增敏研究提供了可靠的實驗基礎。
