《piggyBac轉座子的互動作用研究》是吳敏為項目負責人，南京農業大學為依託單位的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：piggyBac轉座子的互動作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：吳敏
- 依託單位：南京農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
piggyBac（PB）轉座子有廣泛的高轉座活性、強大的負載能力以及切離不留足跡等特點，是動物轉基因領域最具套用前景的載體工具。但是PB轉座子不僅在自然界中廣泛分布，而且保留有大量的活性類似因子，這些內源PB因子與外源載體之間的互動作用是影響目的基因插入穩定性、轉座載體的套用範圍和轉基因生物生態安全性的重要隱患。因此，本項目擬在前期分離獲得了多個活性PB類似因子的基礎上,結合分子生物學技術和生物信息學分析的方法，開展PB轉座子不同末端、亞末端和轉座酶之間互動識別、剪下和轉座的活性以及專一性研究，挖掘影響PB轉座子互作的關鍵功能結構域，最終闡明PB轉座子互動作用的機制及其控制途徑。研究成果對促進PB轉座子套用技術的日趨成熟和完善，推動該技術在昆蟲學領域的套用具有重要的理論和實踐意義。
結題摘要
piggyBac（PB）轉座子有廣泛的高轉座活性、強大的負載能力以及切離不留足跡等特點，是動物轉基因領域最具套用前景的載體工具。但是PB轉座子不僅在自然界中廣泛分布，而且保留有大量的活性類似因子，這些內源PB因子與外源載體之間的互動作用是影響目的基因插入穩定性、轉座載體的套用範圍和轉基因生物生態安全性的重要隱患。因此，本項目擬在前期分離獲得了多個活性PB類似因子的基礎上,結合分子生物學技術和生物信息學分析的方法，開展PB轉座子的互動作用研究。通過活性PB轉座子不同末端和亞末端之間的互動作用檢測，結果發現：活性PB轉座酶只能識別並剪下自身的末端反向重複序列，不能識別和剪下異源的末端反向重複序列；但是PB轉座酶對不同的亞末端反向序列的識別不具有專一性。因此，同源的PB轉座子之間能夠發生互動作用，而異源PB轉座子之間不會發生互動作用。其次，末端反向重複序列的第1、3、4、5和12位點是影響PB轉座子發生互動作用的關鍵功能結構位點，鹼基序列保守。最後，本項目還利用新型的PB轉座子AgoPLE1.1,構建了新型昆蟲轉基因載體，並在果蠅中實現了轉化，轉化效率為2%。綜上所述，本項目闡明了PB轉座子互動作用和影響產生互動作的關鍵位點，並且為開發具有自主智慧財產權的昆蟲轉基因載體奠定了基礎。研究成果對促進PB轉座子套用技術的日趨成熟和完善，推動該技術在昆蟲學領域的套用具有重要的理論和實踐意義。
