《p66Shc介導皮膚細胞SIPS進程中線粒體信號通路的分子機制研究》是依託浙江大學，由王懿娜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：p66Shc介導皮膚細胞SIPS進程中線粒體信號通路的分子機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：王懿娜
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本課題組發現皮膚細胞經亞毒劑量UVB反覆輻射後可進入應激性早衰（SIPS）狀態，出現Redox蛋白p66Shc的活化和上調，伴之以線粒體DNA的大片段缺失突變和叉頭蛋白家族成員FKHRL1的活化。研究已初步證實p66Shc介導了一條全新的氧化應激-線粒體功能通路，但具體調控模式及作用網路亟需進一步明確。本研究擬以皮膚細胞SIPS模型為基礎，以衰老相關酶表達、細胞凋亡/增殖、氧化應激狀態為衰老表型觀察指標，構建p66Shc靶向的siRNA表達載體pRNATU6.1/p66Shc-siRNA，檢測p66Shc-/-皮膚細胞SIPS進程中衰老表型和線粒體結構/功能改變，並以aRNA晶片篩選通路中的差異表達基因，然後以免疫共沉澱和免疫印跡法驗證p66Shc-線粒體信號通路中的相關作用蛋白，在分子水平闡明p66Shc及其介導的氧化應激通路在皮膚細胞SIPS進程中的作用，並發現新的抗衰老作用靶點。
結題摘要
氧化應激是ROS過度生成和抗氧化防禦失衡的細胞損傷病理過程，廣泛存在於腫瘤、炎症、中毒、創傷、缺氧、缺血/再灌注損傷和衰老過程中。闡明其相關的信號通路，不僅有助於明確衰老這一重大生命事件的發生機制，而且有助於揭示其他病理性事件（如細胞凋亡、細胞壞死和腫瘤發生）的病變機制。新近研究發現，氧化還原（Redox）蛋白p66Shc可能介導了一條全新的線粒體信號通路，在氧化應激和細胞衰老過程中發揮的作用令人關注。但這條通路在細胞衰老過程中所承擔的功能，及其調控細胞線粒體功能和氧化應激相關信號的分子機制，目前尚不清楚，需要進一步的相關研究。 本課題第一部分成功構建了干擾真核表達質粒pGPU6/ p66Shc-siRNA，建立了穩定感染並表達p66Shc-siRNA的HEKa細胞系，觀察了該HEKa細胞系衰老表型的改變，揭示了p66Shc 在HEKa氧化應激反應調控中的作用、機制和主要調控靶點，為抗衰老領域提供新的治療靶點。 本課題第二部分觀察了pGPU6/ p66Shc-siRNA對SIPS狀態HEKa增殖、凋亡以及線粒體功能的影響，通過高通量晶片篩選出高度相關的下游靶基因TP53INP1基因，拓展了抗衰老治療的新思路並有助於發現新的研究熱點。
