《neuroplastin 65 對腦卒中神經保護作用及其機制的研究》是依託同濟大學，由袁瓊蘭擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：neuroplastin 65 對腦卒中神經保護作用及其機制的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：袁瓊蘭
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
neuroplastin65(np65)是腦特異性的突觸膜糖蛋白，參與突觸可塑性。我們的實驗發現np65促進小腦顆粒細胞和海馬神經元突起生長、促進神經元存活。np65 是否是一新的神經保護劑？本課題擬用np65 knock down 的小鼠(np65+/- )，首先體外培養其海馬和皮質神經元，觀察神經突起的生長；製備培養神經元損傷模型，觀察神經元的存活率；其次製備np65+/-小鼠腦卒中模型，通過動物神經功能評分和腦梗塞體積觀察np65 對腦卒中的神經保護作用；用Western blotting 、TUNEL 染色、Elisa、免疫雙標等方法從神經元凋亡、神經再生、神經組織重塑、神經營養因子等方面初步探討其機制；最後電生理研究np65+/-小鼠的突觸可塑性。本研究結果將闡明np65 的新功能-神經保護及機制，有助於認識腦的發育與可塑性，並可能為腦卒中等神經疾病的治療開發一新的神經保護劑。
結題摘要
本項對項目的完成情況及取得成果做簡單概述，目根據研究計畫，完成了全部的研究內容。研究成果：1 製備了np65基因敲除（NP65-/-）小鼠，體內和體外海馬神經元培養，免疫染色顯示NP65(-/-) 小鼠海馬神經元表達MAP-2而不表達NP65；2 NP65(-/-) 對神經突起生長的影響：海馬神經元培養48 h，與野生型相比，NP65(-/-) 小鼠海馬神經元神經突起的長度和最長突起長度較野生型的短；初級突起的數目比野生型的多；次級突起的數目和長度無顯著差別。此外，MEK1/2 的特殊抑制劑U0126、JNK inhibitor的特殊抑制劑SB203580和p38MAPK的SP600125，顯著抑制了野生型和NP65(-/-) 小鼠的神經突起的長度都（P＜0.05）；3 NP65(-/-) 不影響馬神經元的活性：海馬神經元培養4天，Hoechst 33258 染色和CCK 試劑盒分析，均顯示，NP65(-/-) 對海馬神經元活性沒有影響；4 NP65(-/-)增強小鼠的認知能力：水迷宮實驗顯示，NP65(-/-)基因敲除小鼠穿越平台的次數較野生型顯著增加；逃避時間比野生型顯著減少，提示NP65（-/-）小鼠學習和記憶功能較較野生型好；5.NP65(-/-) 小鼠GFAP細胞數量顯著增加：尼氏染色顯示神經元胞體的形態特點在NP65(-/-)和野生型小鼠之間沒有差異，但是NP65(-/-)小鼠的海馬神經元密度比野生型顯著增加，而在皮質兩組之間沒有差別；GFAP 免疫染色顯示NP65(-/-)小鼠海馬和大腦皮質的星形膠質細胞的數量較野生型顯著增加；6 NP65(-/-) 抑制長時程增強效應：製備小鼠海馬腦片，神經電生理實驗發現NP65(-/-) 能誘導興奮性突觸後電位，但不能維持。7 高爾基染色顯示NP65(-/-)成年小鼠神經突起數目多； 8 製備腦卒中動脈模型，線拴法製備小鼠大腦中動脈阻塞模型，讓動物存活1周，實驗結果：（1）NP65(-/-)小鼠神經功能損傷程度比野生型輕；（2）TTC 染色顯示，腦卒中1周時，NP65(-/-)小鼠腦梗塞體積比野生型小；（3）尼氏染色顯示，NP65(-/-)小鼠海馬和齒狀回的神經元數量比野生型小鼠的多；（4）TUNEL染色顯示，NP65(-/-)小鼠海馬神經元凋亡的數量比野生型的少。
