《microRNAs納米粒子調控P-糖蛋白逆轉難治性癲癇耐藥的作用》是依託復旦大學，由陳英輝擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNAs納米粒子調控P-糖蛋白逆轉難治性癲癇耐藥的作用
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳英輝
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
P-糖蛋白（P-gp）為代表的多藥轉運體參與了難治性癲癇的多藥耐藥，其作為治療靶點的外源性藥物研究由於明顯的毒副作用和缺乏組織特異性而無法套用於臨床。因此尋求內源性並具有腦靶向性的調控P-gp的分子，將有助於解決這一難題。前期細胞研究表明microRNAs(miRNAs)作為內源性的小分子RNA可以調控P-gp的表達。因此推測miRNAs可以通過調控P-gp參與了難治性癲癇的耐藥。我們在多藥轉運體參與癲癇耐藥以及miRNAs納米粒子構建和體內靶向遞送釋放的前期研究為本項目打下了良好的基礎。本項目擬在電點燃的難治性癲癇大鼠模型上，採用基因晶片技術篩選出多個調控P-gp表達的miRNAs，利用具有腦靶向作用的分子，製備以調控P-gp表達的miRNAs為核心，納米材料為載體的靶向藥物，觀察其對難治性癲癇耐藥的影響。探索miRNAs在癲癇耐藥中的作用，為miRNAs基因藥物的臨床套用奠定基礎。
結題摘要
癲癇是神經系統的常見疾病，但臨床上有約30%的患者對藥物不敏感，稱之為難治性癲癇。以P-糖蛋白（P-gp）為代表的多藥耐藥轉運體參與了難治性癲癇的多藥耐藥，以其作為治療靶點的外源性藥物，由於明顯的毒副作用以及缺乏組織特異性而無法套用於臨床。因此尋求內源性並具有腦靶向的調控P-gp的分子將有助於解決這一難題。MicroRNAs（miRNAs）是一類長度為20-25 核苷酸的內源性非編碼小RNA，主要在轉錄後水平通過引起目標mRNA的降解或抑制其翻譯過程而發揮調控作用，廣泛參與癲癇的發生、發展的各個階段。本課題基於前期細胞研究基礎，miRNAs作為內源性的小分子可以調控P-gp表達。我們利用基因晶片在耐藥的大鼠微血管內皮細胞中篩選差異表達的miRNAs。並利用生物信息學分析以及細胞驗證篩選出多個調控P-gp表達的miRNAs。其次構建以miRNAs為核心，納米材料為載體，具有腦靶向的藥物，研究其對難治性癲癇耐藥的影響及其機制。我們採用qPCR、蛋白免疫印跡、螢光素酶報告基因、免疫組化等方法，在體內和體外不同層面闡述miRNAs調控難治性癲癇腦內P-gp的表達，逆轉耐藥的作用，並且進一步探索了miRNAs作為難治性癲癇患者外周血標誌物的可能性。本課題有以下發現：1.在耐藥的大鼠腦微血管內皮細胞中miR-446b-1-3p表達降低，而miR-146a-5p表達增高，過表達miR-446b-1-3p和miR-146a-5p均可以抑制P-gp的表達，增加細胞內藥物濃度。2.構建以miR-146a-5p為核心，納米材料為載體，具有腦靶向的納米粒子；尾靜脈注射miR-146a-5p-納米粒子後，其可以靶向大鼠腦組織，並且可維持約24小時。3. miR-146a-5p-納米粒子可能通過抑制NF-κB通路下調難治性癲癇大鼠腦內P-gp表達，從而增加腦內AEDs的濃度。4. miR-298可以調控人耐藥的微血管內皮細胞上P-gp表達而增加細胞內藥物濃度。5.在難治性癲癇患者和藥物敏感性患者中篩選出耐藥相關的miR-146a-5p和miR-138-5p，評價其作為預測難治性癲癇外周血的生物標記物的可行性。本研究闡明了miRNAs在難治性癲癇中調控P-gp的作用和機制，為miRNAs基因藥物治療難治性癲癇的提供了基礎。
