《microRNA-495在腫瘤輻射中的增敏機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由付潔擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-495在腫瘤輻射中的增敏機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：付潔
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤細胞的輻射抵抗性是目前採用放療方法治療腫瘤需要克服的問題，挖掘增強腫瘤輻射敏感性的手段具有重要的科學和臨床意義。microRNA對腫瘤輻射敏感性調節的重要意義日益凸顯。本課題組前期證明Four-and-a-half LIM1（FHL1）是重要的新型輻射誘導基因，並且miR-495能靶向作用於FHL1 3'端非翻譯區，通過調節FHL1基因表達繼而調節腫瘤細胞功能。申請人擬針對miR-495在輻射調控中的增敏作用及其機制進行深入研究。選取乳腺癌細胞模型，利用逆轉錄-螢光定量PCR等技術研究電離輻射對miR-495表達的影響；採用分子生物學手段確定靶向FHL1的miR-495與腫瘤細胞輻射敏感性的關係；更深入闡明miR-495在電離輻射中發揮功能的分子機理，為更好地闡明和豐富 miRNAs 在輻射調控中的作用及機理研究，並為解決腫瘤放療和輻射基因治療提供新的理論依據和干預手段。
結題摘要
放療是臨床經典抗腫瘤治療手段之一，但仍存在如下問題：（1）一些腫瘤對射線敏感性不高，因為癌變中已頻繁經歷過染色體雙鏈DNA斷裂等嚴重基因組不穩定性損傷的腫瘤細胞已獲得了對電離輻射損傷的耐受性，導致療效下降。（2）腫瘤細胞在經過離子輻射後，會出現細胞周期阻滯，對損傷的DNA進行修復，避免出現致死性損傷，從而增強細胞的放射抵抗性；（3）輻射損傷的旁效應存在對未輻射器官的損傷作用。因此，需要提高腫瘤細胞對放療的敏感性、減低輻射旁效應，使腫瘤放療方案變得更加合理化、有效化和個體化。已有報導表明，非編碼微小RNA(miRNA)通過選擇調節腫瘤放射細胞信號轉導通路基因，對揭示輻射的分子生物學機制及潛在的放療等腫瘤治療手段的臨床套用價值具有重要意義。本研究圍繞調控輻射誘導基因FHL1的miRNA入手，研究其參與調節電離輻射的機制和潛在套用。本研究表明，HepG2、ZR75-1、Hela輻射後內源miR-495的表達水平較輻射前降低。利用miR-495過表達ZR75-1穩定細胞系經不同劑量照射後通過細胞集落形成情況繪製存活曲線，miR-495可以顯著增強腫瘤細胞的輻射敏感性，且該作用為FHL1依賴性。在乳腺癌細胞系中構建miR-495過表達和對照細胞系，輻射後miR495可以降低SP1、iNOS、eNOS mRNA和蛋白表達水平。生物信息學分析預測結合螢光素酶轉錄活性實驗證明，miRNA495可以直接靶向Sp1，Sp1繼而通過調控eNOS啟動子區域調控eNOS表達。流式和ELISA實驗表明miRNA495過表達，在輻射的條件下降低NO及其表達產物TGF-β。而NO和TGF-β是輻射旁效應的重要介質。體外培養基轉移實驗表明，經過miRNA495過表達的細胞的上清孵育正常肝細胞，與對照組相比，可以減少微核的形成。體內荷瘤動物局部放療實驗表明，過表達miR-495不僅可以使得腫瘤對輻射增敏，還可以保護肝臟免受輻射旁效應的損傷，對照組和非相關miRNA組，肝臟壞死灶增多，而miRNA495過表達組的肝臟趨於正常。本研究已經對於miRNA495的腫瘤輻射增敏及減弱輻射旁效應作用、實施方法及用途已經申請專利，相信經過後續成果轉化和miRNA成藥性研發，完全有可能將該策略用於臨床腫瘤的放療套用。
