《microRNA-21靶向的腫瘤反義基因顯像研究》是依託北京大學，由康磊擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-21靶向的腫瘤反義基因顯像研究
- 項目負責人：康磊
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MicroRNA（miRNA）是一類小分子量的非編碼RNA。研究表明，miRNA與腫瘤的發生和發展關係密切。其中，miRNA-21（miR-21）是目前已知的唯一在幾乎所有惡性腫瘤中均表達上調的原癌作用的miRNA，具有腫瘤廣譜識別特性。而且，miR-21在腫瘤與正常組織的表達具有顯著的差異性，能夠作為腫瘤生物標記物，對腫瘤的早期診斷、惡性程度和預後評價具有重要的價值。因此，本研究採用無創性的放射性核素反義顯像技術，選擇miR-21作為顯像靶點，設計併合成miR-21靶向的反義寡核苷酸，製備放射性核素鎝[99mTc]標記的反義顯像探針，分別從體外穩定性、基因抑制率、腫瘤細胞攝取率以及荷瘤動物體內生物分布、顯像等方面評價其腫瘤靶向識別效能，探討該反義探針作為一種新型腫瘤顯像劑在腫瘤早期、特異、無創、全面診斷中的套用價值。
結題摘要
惡性腫瘤是一類嚴重危害人類生命健康的疾病。選擇一種腫瘤特異性靶向的生物標誌物，通過放射性核素標記探針在基因水平上進行體內靶向示蹤，建立特異性強、靈敏度高且簡單易行的腫瘤顯像技術，對於腫瘤的早期診斷具有重要的研究意義和套用價值。MicroRNA-21（miR-21）已被證實在多種惡性腫瘤具有高表達特性，能促進腫瘤生長和轉移，是一種惡性腫瘤的生物標記物。本課題使用具有特異性結合的抗miR-21的寡核苷酸（AMO）用於miR-21過表達的腫瘤潛在的靶向成像。通過確定miR-21反義互補的寡核苷酸序列，體外化學合成並進行部分2’-甲氧基（2'-OMe）和部分硫代（PS）修飾，經過NHS-MAG3這一雙功能螯合劑的介導作用，製備放射性核素99mTc標記的反義靶向探針。化學修飾後的探針置於人新鮮血清中12h仍可保持高度的穩定性。Western結果顯示，99mTc標記前、後的AMO探針均可通過抑制miR-21的活性進而上調PTEN蛋白的表達，證明該AMO標記探針具有特異性結合及靶向抑制作用。螢光標記的AMO探針亦可在細胞水平顯示腫瘤細胞的靶向分布及良好的穩定性。HeLa荷瘤裸鼠尾靜脈注射後，活體顯像及生物分布結果均顯示miR-21靶向的標記探針與對照探針之間的活體分布存在顯著差異，AMO靶向探針在惡性腫瘤的濃聚遠高於對照組，表明AMO可特異性的分布於miR-21高表達的腫瘤部位。綜上，本課題設計並構建了miR-21靶向的放射性標記的靶向探針，為腫瘤基因顯像提供新型的分子探針，建立了一種在轉錄後水平對惡性腫瘤的早期、動態、定性/定量的診斷或療效評價方法。而且，利用這种放射性核素示蹤技術，對miRNA在生物體內的分布情況進行定性或定量評價，為闡明miRNA在體內的作用機制研究提供新的研究手段。
