《microRNA在飼糧蛋白水平調控母豬情期啟動中的作用及機制》是吳德為項目負責人，四川農業大學為依託單位的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA在飼糧蛋白水平調控母豬情期啟動中的作用及機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：吳德
- 依託單位：四川農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
MicroRNA是一種單鏈小分子RNA，在基因表達的轉錄後水平通過與靶基因mRNA特異性鹼基配對引起mRNA降解或抑制其翻譯，從而對基因表達進行調控。鼠上研究發現，蛋白水平影響後代miRNA表達進而影響其發情表現，但其精確機制不清楚。飼糧蛋白水平能否通過調節生殖軸miRNA表達進而調控情期啟動，在豬上未見報導。本項目以後備母豬為對象，研究蛋白水平對後備母豬發情相關miRNA表達的影響，採用高通量測序檢測miRNA在下丘腦、垂體中的表達，並進一步通過細胞培養、質粒轉染、雙螢光素酶分析和基因定點突變考察特定miRNA調控Kisspeptin/GPR54/GnRH信號途徑影響後備母豬發情啟動的機制，這對深入認識蛋白水平與後備母豬發情啟動的關係及闡明發情啟動的機制將具有重大的理論意義，同時對建立後備母豬的營養方案，調控母豬適時發情和終生繁殖力具有實踐指導意義。
結題摘要
MicroRNA是一種單鏈小分子RNA，在基因表達的轉錄後水平通過與靶基因mRNA特異性鹼基配對引起mRNA降解或抑制其翻譯，從而對基因表達進行調控。鼠上研究發現，蛋白水平影響後代miRNA表達進而影響其發情表現，但其精確機制不清楚。飼糧蛋白水平能否通過調節生殖軸miRNA表達進而調控情期啟動尚不清楚。CircRNAs是非編碼RNA的一種，因為它不具有5'末端帽子和3'末端尾巴結構、並能以共價鍵形成閉合環，所以不易受核酸外切酶的酶切作用而表達穩定。已有研究證實，miR-17-5p具有抑制細胞及組織生長的作用，而circRNAs則可與miRNAs結合後抑制其活性，進而調控其靶基因的表達。但是circRNAs調控miR-17-5p對細胞生長發育的影響尚不清楚。本項目以鼠為對象，研究蛋白水平對雌性大鼠初情啟動和情期循環的影響，並進一步通過細胞培養、質粒轉染、雙螢光素酶分析考察miR-17-5p與circRNAs調控細胞生長的機制。結果表明，蛋白質限飼可損傷性腺發育、卵泡成熟和E2合成，通過下丘腦ERα通路改變kisspeptin和GnRH的活化影響初情啟動；4%蛋白限飼影響發情周期、激素、基因表達，造成此現象的原因主要為飼糧蛋白水平影響肝臟IGF-1合成，通過作用於下丘腦IGF-1R影響KISS-1基因表達，從而對下丘腦-垂體-性腺軸進行調控；miR-17-5p過表達降低了細胞增殖和存活，而circ-Amotl1過表達卻增加了細胞增殖、存活和遷移的能力，促進細胞生長；通過RT-PCR、Western blotting、螢光素酶報告分析發現，circ-Amotl1通過提高Stat3的核轉位能力以及降低miR-17-5p的表達來實現增強細胞活力。本試驗的研究對深入認識蛋白水平與雌性動物發情啟動的關係及闡明發情啟動的機制將具有重大的理論意義。
