《miRNAs在基於TLR5配體亞單位疫苗免疫應答中的調控作用研究》是依託揚州大學，由潘志明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：miRNAs在基於TLR5配體亞單位疫苗免疫應答中的調控作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：潘志明
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
基於TLR5配體的亞單位疫苗免疫效應確實，其免疫應答機理亦獲得初步解析，但該類疫苗免疫應答的調控機制尚不清楚。而microRNAs(miRNAs)對TLR配體活化樹突狀細胞（DCs）具有調節功能。本項目在前期工作的基礎上，選用豬源流感亞單位疫苗候選株HA1-2-FljB這一重組融合蛋白作為研究對象，擬通過miRNA microarray 篩選出重組蛋白活化小鼠BMDCs相關的miRNAs；以TLR5/MyD88信號通路為基礎，鑑定miRNAs的靶標分子；通過體外試驗，評價miRNAs在重組蛋白活化DCs中的功能；構建靶向DCs的重組腺病毒，以體內試驗分析miRNAs對重組蛋白固有免疫和獲得性免疫應答的影響，以論證miRNAs通過對重組蛋白活化DCs的調節，進而對免疫應答具有調控作用的假說，並揭示其作用的分子基礎，以期為基於TLR5配體的高效基因工程疫苗研製提供新理論和新途徑。
結題摘要
基於TLR5配體的亞單位疫苗免疫效應確實，其免疫應答機理亦獲得初步解析，但該類疫苗免疫應答的調控機制尚不清楚。而microRNAs （miRNAs）對TLR配體活化樹突狀細胞（DCs）具有調節功能。本項目在前期工作的基礎上，利用miRNA microarray 篩選出鞭毛蛋白活化小鼠BMDCs過程中相關差異的miRNAs；經qRT-PCR驗證鞭毛蛋白活化BMDCs過程中共有2個差異表達的miRNA，mmu-miR-193-5p和mmu-miR-5112，其均為下調錶達。選取變化差異最顯著的miR-5112為研究對象。通過體內外實驗均證明了鞭毛蛋白在活化小鼠脾臟DCs過程中，miR-5112的表達水平發生下調。利用miR-5112 模擬物通過體內外實驗均證明了miR-5112可以抑制鞭毛蛋白誘導的炎性因子的分泌。以TLR5/MyD88信號通路為基礎，通過生物信息學方法和螢光報告載體實驗證明了miR-5112的靶基因為IKKγ，揭示了miR-5112作用的分子基礎；表明miR-5112可以通過靶向抑制IKKγ的表達間接調控鞭毛蛋白誘導的炎性反應。以鞭毛蛋白與OVA聯合免疫小鼠，miR-5112降低了鞭毛蛋白誘發的炎性反應，且可調控鞭毛蛋白的佐劑效應，為安全有效的鞭毛蛋白佐劑（低炎性損傷高佐劑活性鞭毛蛋白）的獲得提供了新的思路和方法。此外，以鏈黴素預處理的小鼠為模型，發現了miR-5112也可抑制沙門菌誘導的炎性反應，延緩沙門菌誘導的死亡；以DSS誘導的結腸炎小鼠為模型，證實了miR-5112可減緩DSS誘導的結腸炎，降低其炎性應答水平；顯示miR-5112作為炎性應答的重要調節因子，可為炎性疾病的治療提供新的思路和靶點。
